親和層析標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱 萃取柱

親和層析標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱 萃取柱

His 標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱

由于組氨酸標(biāo)簽很小并幾乎不會(huì)干擾目的蛋白的功能、活性或結(jié)構(gòu)，因此被廣泛使用。固定化金屬離子親合層析（IMAC）是純化組氨酸標(biāo)簽蛋白常用的方法。選擇性地負(fù)載共價(jià)金屬離子（比如鎳或鈷）的IMAC層析介質(zhì)能夠截留組氨酸標(biāo)簽蛋白，并在變性條件下，能從包涵體中純化出不溶性的組氨酸標(biāo)簽蛋白。成功的IMAC純化能得到高純度、高產(chǎn)率、高活性的目的蛋白。

因?yàn)楹芏嗟鞍踪|(zhì)有內(nèi)在的組氨酸和/或半胱氨酸氨基酸殘基，其他非特異的蛋白能夠與目的蛋白一起結(jié)合到IMAC填充介質(zhì)上。這種情況下，需要經(jīng)常通過(guò)改變?nèi)芤褐羞溥虻臐舛葋?lái)優(yōu)化結(jié)合、洗滌和洗脫的條件。增加結(jié)合和洗滌緩沖液中咪唑的濃度通常會(huì)降低非特異性結(jié)合，而更低的濃度則導(dǎo)致更強(qiáng)的親和相互作用。找到合適的平衡非常關(guān)鍵。

MBP-標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱

麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）是一種有用的親和標(biāo)簽，它們能增加生成目的蛋白的表達(dá)水平和溶解性。MBP標(biāo)簽也促進(jìn)依附蛋白合適的折疊。因?yàn)镸BP能增加溶解性，這個(gè)標(biāo)簽對(duì)以不溶形式（包涵體）聚集的重組蛋白特別有用。

親和純化在生理?xiàng)l件下發(fā)生，并且使用麥芽糖進(jìn)行溫和地洗脫。溫和的洗脫能保留住MBP標(biāo)簽蛋白的活性。

Strep-tag™ II標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱

Strep-tag™II是一個(gè)只有8個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽，它的相對(duì)分子量只有1000。它的小尺寸非常有好處，因?yàn)樵诮^大多數(shù)情況下它不會(huì)干擾結(jié)構(gòu)和功能研究，因此無(wú)需去除。

Strep-tag™ II特異性地結(jié)合擁有固定在瓊脂糖基底基質(zhì)的StrepTactin™配體的StrepTactin™ Sepharose High Performance以獲得到高純度的目的蛋白。Strep-tag™ II與該配體的結(jié)合親和力是鏈霉親和素的近100倍，使其適合于純化Strep-tag™II蛋白。在生理?xiàng)l件下進(jìn)行純化，含有脫硫生物素的溫和洗脫液保留了目的蛋白的活性。

GST-標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱

谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶(GST) 基因融合系統(tǒng)是用于從大腸桿菌中生產(chǎn)的GST-標(biāo)簽蛋白的表達(dá)、純化和檢測(cè)的通用系統(tǒng)。可在非常溫和的條件下對(duì)GST-標(biāo)簽蛋白進(jìn)行純化，從而保留目的蛋白的功能和抗原性。

GST標(biāo)簽可能增加目的蛋白的溶解性和穩(wěn)定性。GST標(biāo)簽很大，其相對(duì)分子量（Mr）為26000。一段特殊的切割序列允許在純化后用不同的蛋白酶簡(jiǎn)單地去除GST標(biāo)簽。

GST-標(biāo)簽蛋白的典型特點(diǎn)是與谷胱甘肽瓊脂糖層析介質(zhì)上的谷胱甘肽配體高特異性的結(jié)合，一個(gè)步驟就能使洗脫的目的分子的純度超過(guò)90%