常見菌株的復(fù)蘇與活化方法

青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司

一、制定方案

    當(dāng)我們獲得一株菌，在進(jìn)行復(fù)蘇活化之前，首先要了解菌株的生長特性，確定菌株的營養(yǎng)需求、生長溫度、氣體環(huán)境、滲透壓、酸堿度及嗜鹽性等條件，選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)環(huán)境，制定復(fù)蘇活化方案。通常從菌種保藏中心購買的菌株都附帶說明書，按照說明書進(jìn)行操作即可。若沒有說明書，可通過查閱文獻(xiàn)（推薦查看伯杰細(xì)菌手冊或常見細(xì)菌鑒定手冊）等方式確認(rèn)菌株的生長條件，再制定方案。

二、菌株處理及接種操作

    獲得菌株后，原則上應(yīng)盡早進(jìn)行活化和保存。若不能立即活化，應(yīng)按照說明書放入相應(yīng)的環(huán)境中進(jìn)行保存。

    （1）若保存的菌株為凍干粉形式或載體保存形式，可加入少量生理鹽水或非選擇性肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行溶解懸浮，用劃線或涂布方式接種至平板，或吸取菌液至液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。

（2）若保存的菌株為甘油凍存或液體保存形式，可在室溫速融后劃線或涂布接種至平板，或直接加入到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。

（3）若保存的菌株為瓷珠形式，可以挑取單個瓷珠在平板上滾動數(shù)次或直接加入到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。

（4）若保存的菌株為斜面或半固體形式，可直接挑取菌苔轉(zhuǎn)接至平板或液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。

三、培養(yǎng)基的選擇

    活化菌株使用的培養(yǎng)基的成分通常包括以下幾個組分：（1）基本營養(yǎng)成分，如蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉等，主要提供碳源、氮源及微量元素等；（2）氯化鈉：維持一定的滲透壓環(huán)境；（3）磷酸鹽：維持pH的相對穩(wěn)定；（4）特殊成分：如血清、半胱氨酸、氯化血紅素等，促進(jìn)特定菌的生長。根據(jù)菌株的生長特性，選擇合適的培養(yǎng)基或?qū)μ囟ǖ呐囵B(yǎng)基添加成分進(jìn)行改良，以滿足菌株的生長需求，常用活化培養(yǎng)基有以下幾種：

（1）胰酪大豆胨液體/瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯/瓊脂培養(yǎng)基、腦心浸液肉湯/瓊脂培養(yǎng)基：營養(yǎng)豐富，適用于多數(shù)常見細(xì)菌的復(fù)蘇活化培養(yǎng)。

注：可在培養(yǎng)基中加入血液、血清、維生素、氯化血紅素等成分增加營養(yǎng)，培養(yǎng)一些營養(yǎng)苛求的細(xì)菌。

（2）血平板：可使用血液瓊脂基礎(chǔ)加入5%-10%的脫纖維羊血或兔血，也可使用TSA或BHI等培養(yǎng)基做為基礎(chǔ)加入5%-10%的脫纖維羊血或兔血制成血平板，可以培養(yǎng)一些營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌，如彎曲菌、嗜血桿菌、奈瑟氏菌、梭菌、鏈球菌、螺桿菌等。

（3）巧克力平板：與血平板不同的是，利用輕微加熱使血液中的紅細(xì)胞裂解釋放出內(nèi)部各種生長因子，制成的平板呈巧克力色，該培養(yǎng)基常用于嗜血桿菌、奈瑟氏菌、鏈球菌的培養(yǎng)。

（4）MRS肉湯/瓊脂：偏酸的pH和較高的糖含量，適合乳酸菌的生長，常用于乳桿菌、乳球菌、雙歧桿菌等乳酸菌的培養(yǎng)。

（5）2216E液體/瓊脂培養(yǎng)基：與海水相似的成分和滲透壓，常用于海生細(xì)菌的培養(yǎng)，如副溶血性弧菌、溶藻弧菌、哈氏弧菌等，在含3%左右鹽度的培養(yǎng)基中生長旺盛。

（6）皰肉培養(yǎng)基、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：常用于厭氧梭菌的培養(yǎng)，如產(chǎn)氣莢膜梭菌、生孢梭菌等。

注：使用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)厭氧菌時，在培養(yǎng)基表面覆蓋液體石蠟隔絕空氣，無需放入?yún)捬跖囵B(yǎng)箱中，可直接培養(yǎng)厭氧菌（硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基可自然形成厭氧環(huán)境，無需覆蓋液體石蠟，也無需厭氧培養(yǎng)）。

（7）BCYE：專用于軍團(tuán)菌的培養(yǎng)。

（8）沙氏葡萄糖液體/瓊脂培養(yǎng)基：較高的糖含量有利于真菌的生長，常用來培養(yǎng)霉菌、酵母菌等真菌。

（9）支原體肉湯、精氨酸支原體肉湯：需加入血清，用于培養(yǎng)肺炎支原體、口腔支原體等。

（10）ISP2、高氏1號培養(yǎng)基：常用于放線菌的培養(yǎng)。

（11）GAM培養(yǎng)基：該培養(yǎng)基營養(yǎng)較高，可用于多種需氧厭氧菌的培養(yǎng)，如擬桿菌、梭菌、雙歧桿菌等。

（12）羅氏培養(yǎng)基、Middle Brook 7H10：用于分枝桿菌的培養(yǎng)。

注：活化菌株時，通常不宜使用帶有抑菌作用的選擇性培養(yǎng)基，如金黃色葡萄球菌活化可使用TSA/TSB，但通常不宜使用甘露醇氯化鈉瓊脂、Baird-parker瓊脂等選擇性平板進(jìn)行活化。

四、培養(yǎng)條件

（1）溫度：大多數(shù)細(xì)菌最適生長溫度在30-37℃，真菌和放線菌最適生長溫度在20-30℃，彎曲菌最適生長溫度為42℃，嗜熱菌最適生長溫度在55℃左右或更高，嗜冷菌通常在20℃以下生長。

（2）氣體環(huán)境

專性需氧型：如銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌等，需要有氧氣才能生長，在正常的空氣中培養(yǎng)即可。

兼性厭氧型：如大腸桿菌、沙門氏菌等，有氧無氧均可生長良好，在正常的空氣中培養(yǎng)即可。

專性厭氧型：如雙歧桿菌、梭菌、擬桿菌等，氧氣對這些細(xì)菌會產(chǎn)生毒害作用，抑制生長，因此需在專用的厭氧培養(yǎng)箱或厭氧罐中進(jìn)行培養(yǎng)。多數(shù)厭氧菌需5%的二氧化碳促進(jìn)生長。

微需氧型：如彎曲菌、螺桿菌等，適合在5%-10%氧氣的環(huán)境中生長，需在微需氧培養(yǎng)箱或培養(yǎng)罐中進(jìn)行培養(yǎng)。

二氧化碳：一些細(xì)菌的初次培養(yǎng)或分離需要二氧化碳環(huán)境促進(jìn)生長，如肺炎鏈球菌、軍團(tuán)菌等。

（3）其他條件：如光合細(xì)菌需要光照等。

五、常見細(xì)菌的推薦活化培養(yǎng)方式