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氨基酸脫羧酶試驗用培養(yǎng)基使用方法

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稱取本品0.4g,加入0.5g L-氨基酸(或鹽酸鹽),溶解于100mL蒸餾水中,用1mol/L的鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH,使滅菌后在6.8左右(不同形式的氨基酸pH不同,因此加入氨基酸后需對培養(yǎng)基的pH進(jìn)行調(diào)整),分裝于試管,并覆蓋液體石蠟,121℃滅菌15min,冷卻后備用。

注意事項:1.氨基酸有L型和D型,通常需要使用的是L型氨基酸,若使用的氨基酸為LD型混合的,配制培養(yǎng)基時需將氨基酸的量加倍(即添加量為1g/100mL);2.不同的氨基酸pH有差異,一般呈堿性,但市場上售賣的氨基酸多為鹽酸鹽形式(鹽酸鹽形式的氨基酸更為穩(wěn)定,不易變質(zhì)),一般呈酸性,因此配制培養(yǎng)基時,加入氨基酸后必須對培養(yǎng)基的pH進(jìn)行調(diào)整;3.在厭氧環(huán)境下更有利于保存細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生的酸,及促進(jìn)氨基酸脫羧酶的產(chǎn)生,因此需覆蓋液體石蠟隔絕氧氣,不覆蓋石蠟有可能導(dǎo)致結(jié)果不正確。4.有些細(xì)菌的氨基酸脫羧酶產(chǎn)生較慢,因此在遇到陰性試驗結(jié)果時,有時需延長培養(yǎng)數(shù)天才可觀察到陽性結(jié)果。5.本試驗的原理是細(xì)菌前期分解葡萄糖產(chǎn)酸,后期分解氨基酸產(chǎn)堿,培養(yǎng)基呈現(xiàn)由紫色變黃再變紫的過程,最終陽性結(jié)果為紫色,但有些細(xì)菌不能分解葡萄糖產(chǎn)酸,培養(yǎng)基全程都是紫色,此時容易誤判為陽性結(jié)果,因此在進(jìn)行氨基酸脫羧酶試驗是,需要同時接種對照管(即不添加氨基酸的培養(yǎng)基管),當(dāng)對照管與試驗管均為黃色時為陰性反應(yīng),當(dāng)對照管為黃色,試驗管為紫色時,為陽性反應(yīng),若對照管未變黃,說明細(xì)菌為產(chǎn)堿型或氧化型,不能直接判斷陰陽性。


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