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Curiosis血細(xì)胞計數(shù)板除了要會用,還要注意這些事情!

閱讀:2667        發(fā)布時間:2020-12-11

    Curiosis血細(xì)胞計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù),是一種常用的微生物計數(shù)方法。此法的優(yōu)點是直觀、快速。將經(jīng)過適當(dāng)稀釋的菌懸液(或孢子懸液)放在血細(xì)胞計數(shù)板載玻片與蓋玻片之間的計數(shù)室中,在顯微鏡下進行計數(shù)。由于計數(shù)室的容積是一定的(0.1或0.4mm2),所以可以根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來換算成單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)目。由于此法計得的是活菌體和死菌體的總和,故又稱為總菌計數(shù)法。適用于稀釋的菌懸液(或孢子懸液),即液體培養(yǎng)基中菌體的計數(shù)。

    Curiosis血細(xì)胞計數(shù)板操作步驟:

    1.稀釋

    將釀酒酵母菌懸液進行適當(dāng)稀釋,菌液如不濃,可不必稀釋。

    2.鏡檢計數(shù)室

    在加樣前,先對計數(shù)板的計數(shù)室進行鏡檢。若有污物,則需清洗后才能進行計數(shù)。

    3.加樣品

    將清潔干燥的血細(xì)胞計數(shù)板蓋上蓋玻片,再用無菌的細(xì)口滴管將稀釋的釀酒酵母菌液由蓋玻片邊緣滴一小滴(不宜過多),讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自行進入計數(shù)室,一般計數(shù)室均能充滿菌液。(此處浙科版課本P73有誤)注意不可有氣泡產(chǎn)生。

    4.顯微鏡計數(shù)

    靜止5分鐘后,將血細(xì)胞計數(shù)板置于顯微鏡載物臺上,先用低倍鏡找到計數(shù)室所在位置,然后換成高倍鏡進行計數(shù)。在計數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀,需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計數(shù)。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5—10個菌體為宜。每個計數(shù)室選4或5個中格中的菌體進行計數(shù)。

    鏡檢計數(shù)方法:①方格內(nèi)細(xì)胞的計數(shù)順序為左上→右上→右下→左下。②壓在方格線上的細(xì)胞只計左線和上線上的細(xì)胞數(shù)。③酵母細(xì)胞若有粘連,要數(shù)出團塊中的每一個細(xì)胞。④出芽酵母的芽體體積若超過細(xì)胞體積的1/2,則算獨立個體。⑤計數(shù)總數(shù)不少于300個細(xì)胞。

    5.清洗血細(xì)胞計數(shù)板

    使用完畢后,將血細(xì)胞計數(shù)板在水籠頭上用水柱沖洗,切勿用硬物洗刷,洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機吹干。鏡檢,觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈,則必須重復(fù)洗滌至干凈為止。

    Curiosis血細(xì)胞計數(shù)板注意事項:

    (1)進行計數(shù)前,應(yīng)先將試管搖勻,目的是使酵母菌在培養(yǎng)液中混合均勻,以減少計數(shù)誤差。

    (2)顯微鏡計數(shù)時,對于壓在小方格界線上的酵母菌,應(yīng)取相鄰兩邊及頂角計數(shù)。

    (3)若一個小方格內(nèi)酵母菌數(shù)量過多,難以數(shù)清時,則可將培養(yǎng)液稀釋一定倍數(shù)后再計數(shù)。

    (4)本實驗無另設(shè)對照實驗,酵母菌每天的數(shù)量變化可形成前后對照。

    (5)血細(xì)胞計數(shù)板使用后,切勿用硬物洗刷,可采用浸泡和沖洗的方法清洗。

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