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詳細(xì)介紹
商品屬性：
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
心臟組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X7587 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠心臟纖維原分離自心臟組織；心臟由心肌細(xì)胞和非心肌細(xì)胞組成，非心肌細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的70%，其中90%以上的非心肌細(xì)胞由心肌成纖維細(xì)胞組成。纖維細(xì)胞是機(jī)能不活躍的成纖維細(xì)胞。胞體呈梭形，胞質(zhì)較少，弱嗜酸性，胞核小，染色深。電鏡下可見，細(xì)胞中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體均不發(fā)達(dá)。當(dāng)組織受損時(shí)，纖維細(xì)胞可轉(zhuǎn)化為成纖維細(xì)胞而參與修復(fù)過(guò)程。纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞是處于不同功能狀態(tài)的同一種細(xì)胞，如在組織損傷后的修復(fù)過(guò)程中，纖維細(xì)胞可轉(zhuǎn)化為功能活躍的成纖維細(xì)胞。纖維細(xì)胞較小，呈多角形，胞質(zhì)較少，弱嗜酸性，胞核亦較小，染色較深，電鏡下粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較少，高爾基復(fù)合體不發(fā)達(dá)。成纖維細(xì)胞較大，呈星形或梭形，有突起，細(xì)胞核呈卵圓形，染色質(zhì)稀疏，染色淡，核仁明顯，胞質(zhì)較多。成纖維細(xì)胞能合成和分泌膠原蛋白、彈性蛋白和蛋白多糖，形成膠原纖維、彈性纖維和網(wǎng)狀纖維以及基質(zhì)成分。心肌成纖維細(xì)胞主要功能為對(duì)心肌細(xì)胞起結(jié)構(gòu)支持作用并負(fù)責(zé)細(xì)胞基質(zhì)外的合成，當(dāng)心肌損傷時(shí)能產(chǎn)生旁分泌生長(zhǎng)因子。心肌成纖維細(xì)胞是心臟結(jié)締組織中最常見的細(xì)胞，可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維及有機(jī)基質(zhì)，并且在外傷等因素刺激下，部分纖維細(xì)胞可重新轉(zhuǎn)變?yōu)橛字傻某衫w維細(xì)胞，其功能活動(dòng)也得以恢復(fù)，參與組織損傷后的修復(fù)。因此，對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的生理學(xué)研究成為現(xiàn)代心血管領(lǐng)域研究的一個(gè)重點(diǎn)。
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠心臟纖維原采用膠原酶消化法制備而來(lái)制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠心臟纖維原經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞傳代及凍存：
| 細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
| 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
血漿游離基因組 Plasma free genomic DNA Exaction Kit
M13單鏈基因組DNA快速提取試劑盒 Rapid exaction kit for M13 phage single chain genomic DNA
λ基因組DNA快速提取試劑盒 Fast exaction kit for phage genomic DNA
超土壤基因組DNA快速提取試劑盒 Rapid exaction kit for genomic DNA in soil
小鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human perinuclear ai neuophil cytoplasmic aibody (pANCA) ELISA Kit 人抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)試劑盒
Humanmelatoninsulfate,MSELISAKit 人硫酸褪黑色素(MS)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforABeta1-40(Mouseamyloidbetapeptide1-40)ELISAKit小鼠β淀粉樣蛋白
乙肝病毒DNA化試劑盒20次
MouseMyoglobin,MYO/MBELISAKit小鼠肌紅蛋白(MYO/MB)試劑盒規(guī)格：96T/48T
ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX1抗體
補(bǔ)體因子H重組兔單克隆抗體
LILRB3重組小鼠 LILRB3 / LIR3 / ILT5 / CD85a 蛋白 Protein
白介素7(IL7)重組蛋白 Recombinant Interleukin 7 (IL7)
GUCA1A重組人 GCAP1 / GUCA1A 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
CCL17 Protein Human 重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白
IL2RA Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL2RA 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
ANPEN/CD13(Aminopeptidase N 0.5mgANPEN/CD13(Aminopeptidase N) 氨肽酶N抗原
CCL17 Protein Human 重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白
F11R重組小鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽) Protein
CD68 Protein Rat 重組大鼠 CD68 / Macrosialin 蛋白
PA2G4重組人 EBP1 / PA2G4 蛋白 Protein
小鼠心臟纖維原細(xì)胞大鼠蛋白激酶B(PKB)試劑盒 ，英文名： PKB ELISA Kit
Porcine serum niic oxide (NO) ELISA Kit 豬血清(NO)試劑盒
ELISA 小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(mouse ACE) 進(jìn)口分裝
CLIAKitforLp-PL-A2ELISAKit大鼠脂蛋脂酶A2
通用細(xì)胞HRP酶聯(lián)檢測(cè)封閉溶液100毫升
ELISAKitFSH雞促卵泡素
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L；
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂??；
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液；
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞；
2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行；
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進(jìn)行分瓶試驗(yàn)；
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí)，淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清，以利細(xì)胞生長(zhǎng)；
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次；
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行
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