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詳細(xì)介紹
商品屬性：
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
卵巢 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X8513 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠卵泡基膜（卵泡膜細(xì)胞）分離自卵巢組織；卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側(cè)發(fā)育（右側(cè)已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時(shí)期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān)。大多數(shù)脊椎動(dòng)物有兩個(gè)卵巢，但是部分魚類的兩個(gè)卵巢融合為單個(gè)結(jié)構(gòu)，而所有鳥類只有左側(cè)卵巢有機(jī)能。卵巢是位于子宮兩側(cè)的一對(duì)卵圓形的生殖器官，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結(jié)締組織。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì)。皮質(zhì)位于卵巢的周圍部分，主要由卵泡和結(jié)締組織構(gòu)成；髓質(zhì)位于中央，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，其中有許多血管、淋巴管和神經(jīng)。哺乳動(dòng)物的卵巢內(nèi)卵泡的發(fā)育需要相關(guān)激素的調(diào)節(jié)才能完成，垂體素（卵泡刺激素和黃體生成素）使原始卵泡開始發(fā)育，其過程中還產(chǎn)生大量的雌激素。雌激素是卵巢的顆粒細(xì)胞和卵泡膜細(xì)胞在垂體素的作用下協(xié)同合成的，卵泡膜細(xì)胞合成的雄激素透過基膜進(jìn)入顆粒細(xì)胞，并轉(zhuǎn)變?yōu)榇萍に?。因此，卵泡膜?xì)胞在生殖內(nèi)分泌調(diào)節(jié)中占有關(guān)鍵的位置，了解其在病理及生理中的作用，對(duì)于與性激素有關(guān)的婦產(chǎn)科疾?。ㄈ缍嗄衣殉簿C合癥、卵巢癌等）的研究有著重要意義。在哺乳動(dòng)物卵泡生長(zhǎng)發(fā)育的過程中，卵母細(xì)胞由不斷增加的顆粒細(xì)胞層包裹。卵巢組織中的膜細(xì)胞作為卵泡的外層細(xì)胞可以維持卵泡結(jié)構(gòu)的完整性，參與構(gòu)成卵母細(xì)胞和顆粒細(xì)胞發(fā)育的微環(huán)境且為類固醇激素的生成提供底物。在哺乳動(dòng)物中調(diào)節(jié)膜細(xì)胞類固醇激素生成的機(jī)制已見相關(guān)報(bào)道，但是有關(guān)卵泡膜細(xì)胞的聚集、生長(zhǎng)和分化的研究尚不深入。
方法簡(jiǎn)介：
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠卵泡基膜采用先機(jī)械分離后膠原酶消化結(jié)合Percoll密度梯度離心法、并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠卵泡基膜經(jīng)3β-HSD免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、EGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
小鼠卵泡基膜體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞傳代及凍存：
| 細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
| 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠β細(xì)胞素(BTC)試劑盒
小鼠β葡萄糖酸苷酶(βGD)試劑盒
小鼠β葡糖苷酶(β-glucosidase)試劑盒
小鼠β酚(β-naphthol)LISA試劑盒
PE標(biāo)記人CD1a單克隆抗體
快速發(fā)育生長(zhǎng)因子同源蛋白2抗體
APCS重組小鼠 Serum amyloid P component / APCS / SAP 蛋白 Protein
CNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2 0.5mgCNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2) 環(huán)核苷酸陽離子通道蛋白α2抗原
BNIP3L重組人 BNIP3L 蛋白 Protein
F3 Protein Human 重組人 Coagulation Factor III / Tissue Fac僀?僀
CNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2 0.5mgCNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2) 環(huán)核苷酸陽離子通道蛋白α2抗原
F3 Protein Human 重組人 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
APCS重組小鼠 Serum amyloid P component / APCS / SAP 蛋白 Protein
FZD1 Protein Mouse 重組小鼠 Frizzled-1 / FZD1 蛋白
BNIP3L重組人 BNIP3L 蛋白 Protein
小鼠橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α (sm Actinin-α)ELISA pcr檢測(cè)試劑盒
Rat thioredoxin (x) ELISA Kit 大鼠硫氧化還原蛋白(x)試劑盒
humanUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit 人高敏甲狀腺素(u-T4)pcr檢測(cè)試劑盒分裝
humanai-neuophilcytoplasmicaibody,cANCA試劑盒人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)試劑盒(包括抗體)10次
humanulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISAKit人高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠卵泡基膜細(xì)胞大鼠淋巴毒素β(LTβ)試劑盒 ，英文名： LTβ ELISA Kit
Mouse inhibin A (INH-A) ELISA Kit 小鼠抑制素A(INH-A)試劑盒
RatEndomeiumAibody,EMAbELISAKit 大鼠抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)pcr檢測(cè)試劑盒分裝
CLIAKitforGamma-ECS(HumanGamma-glamylsysteinesyhetase)ELISAKit人γ谷氨酰半胱合成酶
細(xì)胞骨架(肌動(dòng)蛋白微絲;F-ACTIN)綠色熒光染色試劑盒10次
RatProstaticAcidPhosphatase,PAPELISAKit大鼠前列腺酸性0酸酶(PAP)試劑盒規(guī)格：96T/48T
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L；
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂?。?/p>
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液；
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞；
2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行；
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進(jìn)行分瓶試驗(yàn)；
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí)，淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清，以利細(xì)胞生長(zhǎng)；
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次；
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行
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