詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
眼球 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 梭形、多角形 | YS-01X7371 |
細胞簡介:
小鼠小梁網(wǎng)分離自眼球組織;小梁網(wǎng)由角膜基質(zhì)纖維、后界膜和角膜內(nèi)皮向后擴展而成,覆蓋在鞏膜靜脈竇的內(nèi)側(cè)。小梁網(wǎng)細胞在眼內(nèi)壓調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用;小梁網(wǎng)細胞內(nèi)有特定的神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)肽受體,其中包括腎上腺素、乙酰和神經(jīng)肽Y。青光眼是由于眼內(nèi)壓力升高而造成的一種逆致盲眼病,小梁網(wǎng)細胞的體外培養(yǎng)是青光眼病因?qū)W研究的重要手段之一。在小梁網(wǎng)細胞中,一長串的血管活性多肽和生長因子能夠觸發(fā)細胞內(nèi)信號傳導機制,小梁網(wǎng)細胞可合成不同類型的細胞外基質(zhì)蛋白以及金屬蛋白酶。形態(tài)學觀察可見,剛從組織塊長出的原代細胞,形態(tài)各異,多數(shù)呈星狀或不規(guī)則形。細胞有胞突,核橢圓形,胞體肥大,胞漿豐富,且可見吞噬顆粒。隨著細胞的增生及相互融合為單層,細胞的形態(tài)趨于一致。胞漿的色素顆粒及胞突消失,排列緊密呈類似上皮細胞的扁橢圓形或不規(guī)則形。胞體透亮,包膜清晰。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠小梁網(wǎng)采用組織貼塊法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的小鼠小梁網(wǎng)經(jīng)NSE(神經(jīng)元特異性烯醇化酶)免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠酶(CA)試劑盒 96T/48T
小鼠胎盤生長因子(PLGF)試劑盒 96T/48T
小鼠羧甲基賴酸(CML)試劑盒 96T/48T
小鼠髓0脂堿性蛋白(MBP)試劑盒 96T/48T
小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)ELISA 試劑盒 96T/48T
The formation of red blood cells of rat prolactin receptor (EPOR) ELISA Kit 大鼠紅細胞生成素受體(EPOR)試劑盒
Humaerminaldeoxynucleotidylansferase,TdTELISAKit 人末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Chickenverylowdensitylipoprotein,VLDL試劑盒雞極低密度脂蛋白(VLDL)試劑盒規(guī)格:96T/48T
載玻片細胞TUBULIN蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次
MouseErythropoietin,EPOELISAKit小鼠紅細胞生成素(EPO)試劑盒規(guī)格:96T/48T
AF680標記的環(huán)指蛋白15抗體
白介素17F抗體
MMP9重組人 MMP-9 / CLG4B 蛋白 Protein
拓撲異構(gòu)酶Ⅱ(TOP2)重組蛋白 Recombinant Topoisomerase II (TOP2)
XG重組人 Glyco蛋白 Xg / PBDX 蛋白 Protein
CHI3L1 Protein Human 重組人 CHI3L1 / YKL40 蛋白
HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Japanese white-eye/Hong Kong/1038/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白
拓撲異構(gòu)酶Ⅱ(TOP2)重組蛋白 Recombinant Topoisomerase II (TOP2)
CHI3L1 Protein Human 重組人 CHI3L1 / YKL40 蛋白
MMP9重組人 MMP-9 / CLG4B 蛋白 Protein
HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Japanese white-eye/Hong Kong/1038/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白
XG重組人 Glyco蛋白 Xg / PBDX 蛋白 Protein
小鼠小梁網(wǎng)細胞大鼠蛋白激酶Cθ(PKCθ)試劑盒 ,英文名: PKCθ ELISA Kit
N terminal brain naiuretic peptide (-proBNP) ELISA Kit 人N端前腦素(-proBNP)試劑盒
Ratsolubleierleukin-1receptorⅡ,IL-1sRⅡELISAkit 大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforCyclin-D1ELISAKit大鼠細胞周期素D1
細胞色素P450亞酶CYP2E(AH)活性熒光定量試劑盒20次
Ratferritin,FEELISAKit大鼠鐵蛋白(FE)試劑盒規(guī)格:96T/48T
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行