化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
商品屬性：
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
腎組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細(xì)胞樣 | YS-01X7253 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠腎足突分離自腎組織；腎小球是腎元中的用于將血液過(guò)濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動(dòng)脈進(jìn)入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動(dòng)脈。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進(jìn)行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱(chēng)為腎小體，腎小球的過(guò)濾速率便稱(chēng)為腎小球過(guò)濾率。足細(xì)胞（podocyte）即腎小囊臟層上皮細(xì)胞，它附著于腎小球基底膜（GBM）的外側(cè)，連同GBM和毛細(xì)血管內(nèi)皮一起構(gòu)成了腎小球血液濾過(guò)屏障。足細(xì)胞特殊的解剖位置，使得其體內(nèi)研究較為困難；又由于正常成年機(jī)體的腎臟足細(xì)胞是一種終末分化細(xì)胞，體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞不能增殖。足細(xì)胞呈星型多突狀，胞體較大，由胞體伸出許多突起，又稱(chēng)足突（FP），呈指狀交叉復(fù)蓋于GBM外表面，并通過(guò)黏附分子和蛋白多糖分子與GBM相連。足細(xì)胞在正常情況下可以分泌GBM的主要組成成分，IV型膠原和纖維連接蛋白（FN）；在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解GBM作用的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）和組織蛋白酶，從而在GBM的代謝平衡中發(fā)揮重要作用。足細(xì)胞之間鄰近的足突相互交替，形成了許多30-40nm的裂孔，孔上覆蓋一層厚4-6nm的裂孔隔膜，即腎小球足突間裂孔隔膜。后者是血漿蛋白通過(guò)脈管系統(tǒng)的最后屏障，對(duì)于維持腎小球?yàn)V過(guò)屏障結(jié)構(gòu)與功能完整性發(fā)揮關(guān)鍵作用。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L；
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂??；
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液；
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞；
2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行；
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進(jìn)行分瓶試驗(yàn)；
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí)，淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清，以利細(xì)胞生長(zhǎng)；
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次；
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腎足突采用機(jī)械研磨過(guò)不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩結(jié)合膠原酶消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腎足突經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞傳代及凍存：
| 細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
| 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀(guān)察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠網(wǎng)膜素(omein)ELISAKit ELISA. 96T/48T
兔子組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠孤腓肽(OFQ/N)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human vacuolating cytotoxin associated protein A (VacA) ELISA Kit 人空泡毒素相關(guān)蛋白A(VacA)試劑盒
Humanα2-Aiplasmin,α2-APELISAKit 人α2抗纖溶酶(α2-AP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitfor(Mouseovariancancermarker-CA125)ELISAKit小鼠卵巢癌標(biāo)志物CA125
飲料乙比色法定量試劑盒20次
MouseIerleukin9,IL-9ELISAKit小鼠白介素9(IL-9)試劑盒規(guī)格：96T/48T
WD重復(fù)蛋白76抗體
PE-Cy5.5標(biāo)記人CD14單克隆抗體
SPINK4重組小鼠 SPINK4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
酸脫氫酶0酸酶(PDP)重組蛋白 Recombinant Pyruvate Dehydrogenase Phosphatase (PDP)
COMMD9重組人 COMMD9 蛋白 Protein
CD300A Protein Human 重組人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 蛋白
DDR2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白
酸脫氫酶0酸酶(PDP)重組蛋白 Recombinant Pyruvate Dehydrogenase Phosphatase (PDP)
CD300A Protein Human 重組人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 蛋白
SPINK4重組小鼠 SPINK4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
DDR2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白
COMMD9重組人 COMMD9 蛋白 Protein
小鼠腎足突細(xì)胞大鼠多藥耐藥蛋白1(ABCB1)試劑盒 ，英文名： ABCB1 ELISA Kit
Porcine glucose anspoer 2 (GL2) ELISA Kit 豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GL2)試劑盒
動(dòng)物源性成分(18S)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>) 48T
CLIAKitforLZM(RabbitLysozyme)ELISAKit兔
體液總膽汁酸酶循環(huán)比色法定量試劑盒20次
ELISAKitPF-4/CXCL4雞血小板因子4
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