詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
腎組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X7257 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠腎成纖維分離自腎組織;腎臟是機(jī)體的重要器官,它的基本功能是生成尿液,借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物,同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì),如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等,以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能,生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性維生素D3、前列腺素、激肽等,又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場(chǎng)所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,使新陳代謝得以正常進(jìn)行。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損以及骨創(chuàng)傷的修復(fù)有著十分重要的作用。腎成纖維細(xì)胞是腎臟結(jié)締組織中最重要的細(xì)胞類型,在體外培養(yǎng)中,一般大致成梭形、多角形或不規(guī)則形等,為貼壁生長(zhǎng)型細(xì)胞。剛分離的腎成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開(kāi)始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長(zhǎng),不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長(zhǎng),平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。其主要功能有:①組成過(guò)濾屏障內(nèi)壁的重要部分;②在炎癥和致血栓物質(zhì)的刺激合成必要的生物活性分子;③受損后影響系膜細(xì)胞和上皮細(xì)胞,進(jìn)而影響腎臟病變。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腎成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腎成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子C(VEGF-C)試劑盒 96T/48T
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B(VEGF-B)試劑盒 96T/48T
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)試劑盒 96T/48T
小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)試劑盒 96T/48T
小鼠腺病毒(ADV)試劑盒 96T/48T
Rat Leptospira IgG (Lebtospira) ELISA Kit 大鼠鉤端IgG(Lebtospira)試劑盒
Humanisociatedehydrogenase,ICDELISAKit 人異檸檬酸脫輕酶(ICD)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
ChickenEpidermalgrowthfactor,EGF試劑盒雞表皮生長(zhǎng)因子(EGF)試劑盒規(guī)格:96T/48T
載玻片細(xì)胞CASPASE-3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次
MousehepatitisBviruseaigen,HBeAgELISAKit小鼠乙型肝e抗原(HBeAg)試劑盒規(guī)格:96T/48T
RNA(9)甲基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體
LRP1B小鼠單克隆抗體
HA重組甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein
SCN9A/NAV1.7(Sodium channel protein type 9 subunit alpha 0.5mgSCN9A/NAV1.7(Sodium channel protein type 9 subunit alpha) 電壓開(kāi)啟的離子通道SCN9A抗原
GCK重組人 Glucokinase / GCK 蛋白 Protein
CD8B Protein Human 重組人 CD8B / P37 / LEU2 蛋白
IL1RL1 Protein Human 重組人 IL1RL1 / DER4 蛋白
SCN9A/NAV1.7(Sodium channel protein type 9 subunit alpha 0.5mgSCN9A/NAV1.7(Sodium channel protein type 9 subunit alpha) 電壓開(kāi)啟的離子通道SCN9A抗原
CD8B Protein Human 重組人 CD8B / P37 / LEU2 蛋白
HA重組甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein
IL1RL1 Protein Human 重組人 IL1RL1 / DER4 蛋白
GCK重組人 Glucokinase / GCK 蛋白 Protein
小鼠腎成纖維細(xì)胞大鼠泛素連接酶(E3/UBPL)試劑盒 ,英文名: E3/UBPL ELISA Kit
Pig phosphorylation of exacellular signal regulated kinase (pERK) ELISA Kit 豬0酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(pERK)試劑盒
羊特定基因序列(Ovine)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>) 48T
CLIAKitforMAdCAM-1(Humanmucosaladdressincelladhesionmolecule-1)ELISAKit人黏膜地址素細(xì)胞黏附分子
體液乙酰酯酶活性比色法定量試劑盒20次
ELISAKitVTG鯉魚卵黃蛋白原
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行