詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
骨髓 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 圓形、梭形、多角形,形態(tài)多樣 | YS-01X8292 |
細(xì)胞簡介:
人骨髓樹突狀分離自骨髓;骨髓是機(jī)體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用,白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細(xì)菌、病毒等;某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時,紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細(xì)胞增多,相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細(xì)胞是由骨髓單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的;樹突狀細(xì)胞分為成熟樹突狀細(xì)胞和未成熟樹突狀細(xì)胞,典型的未成熟樹突狀細(xì)胞呈半貼壁生長,在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,細(xì)胞大而形態(tài)不規(guī)則,表面皺褶多,亦可見少量短刺狀突,胞內(nèi)細(xì)胞器豐富并可見吞噬泡,具有較強(qiáng)的遷移能力,伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細(xì)胞,貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細(xì)胞由未成熟DC進(jìn)一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導(dǎo)而成,多數(shù)呈懸浮生長, 細(xì)胞呈圓形,細(xì)胞體積進(jìn)一步增大,表面大量粗細(xì)不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),伴隨少量貼壁未成熟細(xì)胞或者單核細(xì)胞。未成熟DC細(xì)胞長時間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟。DC細(xì)胞尚無特異性細(xì)胞表面分子標(biāo)志,主要通過形態(tài)學(xué)、組合性細(xì)胞表面標(biāo)志、在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能激活初始T細(xì)胞等特征進(jìn)行鑒定。其中成熟樹突狀細(xì)胞表面高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子,進(jìn)而激活T淋巴細(xì)胞,誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié);未成熟樹突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗原攝取加工能力,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細(xì)胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答,不能激活T細(xì)胞的第二信號,可導(dǎo)致T細(xì)胞無能,從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細(xì)胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達(dá)較低,一般在30%以下。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行。
方法簡介:
實(shí)驗室分離的人骨髓未成熟DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個核細(xì)胞、培養(yǎng)過程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實(shí)驗室分離的人骨髓樹突狀(未成熟DC細(xì)胞)經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細(xì) 胞 形態(tài)等綜合鑒定,純度可達(dá)80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài):圓形、梭形、多角形,形態(tài)多樣
傳代特性:屬于高度分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
人骨髓樹突狀(未成熟DC細(xì)胞)體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)試劑盒 96T/48T
小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)試劑盒 96T/48T
小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)試劑盒 96T/48T
小鼠抗心肌抗體(AMA)試劑盒 96T/48T
小鼠內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human spleen tyrosine kinase (Syk) ELISA Kit 人脾臟酪激酶(Syk)試劑盒
HumanATP-bindingcassetteanspoerA1,ABCA1ELISAKit 人腺苷三0酸結(jié)合 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanADisiegrinAndMetalloprotease10,ADAM10試劑盒人解整合素樣金屬蛋白酶10(ADAM10)試劑盒規(guī)格:96T/48T
正常男性人體肝組織S9組分(5毫克/毫升)500微升
MouseAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit小鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)試劑盒規(guī)格:96T/48T
G蛋白偶聯(lián)受體52抗體
神經(jīng)調(diào)節(jié)肽S抗體
CD47重組大鼠 CD47 蛋白 Protein
FoxP1(Forkhead box P1 0.5mgFoxP1(Forkhead box P1) FoxP1(T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子)抗原
MICA重組人 MICA 蛋白 Protein
CST9L Protein Human 重組人 CST9L / Testatin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
EPHA6 Protein Mouse 重組小鼠 EphA6 / EHK-2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽)
FoxP1(Forkhead box P1 0.5mgFoxP1(Forkhead box P1) FoxP1(T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子)抗原
CST9L Protein Human 重組人 CST9L / Testatin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
CD47重組大鼠 CD47 蛋白 Protein
EPHA6 Protein Mouse 重組小鼠 EphA6 / EHK-2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽)
MICA重組人 MICA 蛋白 Protein
人骨髓樹突狀細(xì)胞(未成熟DC細(xì)胞)大鼠白介素15(IL-15)試劑盒 ,英文名: IL-15 ELISA Kit
Mouse pyruvate kinase (PK) ELISA Kit 小鼠酸激酶(PK)試劑盒
ELISA 小鼠抑制素B(mouse Inhibin B) 進(jìn)口分裝
CLIAKitforIL-2R(MouseIerleukin-2receptor)ELISAkit小鼠白介素2受體
通用型離子(K)濃度化學(xué)比色法定量試劑盒50次
ELISAKitN-AChR大鼠型乙酰受體