詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
肝臟組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細(xì)胞樣 | YS-01X7168 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
人肝內(nèi)膽管上皮分離自肝臟組織;肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官,并在身體里面起著去氧化、儲(chǔ)存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用;肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里的器官,位于機(jī)體中的腹部位置,在右側(cè)橫隔膜之下,位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中的消化腺,為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官,又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu):肝臟位于右上腹,隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面,大部分肝為肋弓所復(fù)蓋,僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,肝上面則與膈及腹前壁相接。通過(guò)控制激素調(diào)控的分泌和吸收,在保持、調(diào)整和擴(kuò)大膽小管的結(jié)構(gòu)中發(fā)揮重要作用,肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞在先天性和獲得性免疫應(yīng)答方面起著積極作用。肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞約占肝細(xì)胞總數(shù)的5%,其在肝內(nèi)膽道系統(tǒng)內(nèi)形成復(fù)雜的網(wǎng)狀管形結(jié)構(gòu)。肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞具有復(fù)雜的生理代謝功能,參與肝臟的代謝、排泌、免疫等生理過(guò)程,在肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起一定的作用。研究表明,常見(jiàn)的肝內(nèi)膽管病變例如原發(fā)性硬化性膽管炎、膽管癌等疾病,都是以肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞為病變靶位,進(jìn)而引起肝內(nèi)膽管上皮損傷。因此,了解正常肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的生物學(xué)特征和病變肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的病理特征對(duì)研究肝內(nèi)膽管病變的發(fā)病機(jī)制、診斷和治療具有重要意義。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肝內(nèi)膽管上皮采用膠原酶灌注消化法后,再用膠原酶-DNA酶聯(lián)合消化,接種至預(yù)先包被鼠尾膠原的培養(yǎng)瓶中,通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肝內(nèi)膽管上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
兔子脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISAKit ELISA. 96T/48T
兔子組織因子(TF)ELISAKit ELISA. 96T/48T
兔子骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISAKit ELISA. 96T/48T
兔子組織多肽抗原(TPA)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠苯(LPA)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human general anscription complex (GTC) ELISA Kit 人通用轉(zhuǎn)錄復(fù)合體(GTC)試劑盒
HumanCyclin-dependekinase4,CDK-4ELISAKit 人周期素依賴性激酶4(CDK-4)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanbreastcancersusceptibilityprotein1,BRCA-1試劑盒人癌易感蛋白1(BRCA-1)試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物組織細(xì)胞核高分離試劑盒10次
HumanSpecifieMacrophageArmingPaetot,SMAFELISAKit人特異性巨噬細(xì)胞武裝因子(SMAF)試劑盒規(guī)格:96T/48T
胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白2抗體
周期素依賴性激酶9抗體
LGMN重組野豬 Legumain / LGMN / AEP 蛋白 Protein
NF2/merlin(neurofibromatosis type 2 0.5mgNF2/merlin(neurofibromatosis type 2) 2型神經(jīng)纖維瘤抗原
TNFRSF8重組人 CD30 / TNFRSF8 蛋白 Protein
GADD45G Protein Human 重組人 GADD45G / CR6 蛋白
CCNE1 Protein Mouse 重組小鼠 CCNE1 / Cyclin-E1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)
NF2/merlin(neurofibromatosis type 2 0.5mgNF2/merlin(neurofibromatosis type 2) 2型神經(jīng)纖維瘤抗原
GADD45G Protein Human 重組人 GADD45G / CR6 蛋白
LGMN重組野豬 Legumain / LGMN / AEP 蛋白 Protein
CCNE1 Protein Mouse 重組小鼠 CCNE1 / Cyclin-E1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)
TNFRSF8重組人 CD30 / TNFRSF8 蛋白 Protein
人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(PECAM1)試劑盒 ,英文名: PECAM1 ELISA Kit
Mouse coagulation (F x) ELISA Kit 小鼠Ⅹ(FⅩ)試劑盒
MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein4,IGFBP-4ELISAkit 小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumancoagulationfactorIX,FIXELISAKit人Ⅸ
細(xì)胞CDK5/P35激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitCR大鼠鈣結(jié)合蛋白
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂浮;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。