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詳細(xì)介紹
商品屬性：
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
外周血 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 短梭形 | YS-01X7512 |
細(xì)胞簡介：
人NK分離自人外周血單個核細(xì)胞；NK細(xì)胞即自然殺傷細(xì)胞（natural killer cell，NK）是機體重要的免疫細(xì)胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生，能夠識別靶細(xì)胞、殺傷介質(zhì)。NK細(xì)胞來源于骨髓淋巴樣干細(xì)胞，其分化、發(fā)育依賴于骨髓及胸腺微環(huán)境，主要分布于骨髓、外周血、肝、脾、肺和淋巴結(jié)。NK細(xì)胞不同于T、B細(xì)胞，是一類無需預(yù)先致敏就能非特異性殺傷腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的淋巴細(xì)胞。由于NK細(xì)胞的殺傷活性無MHC限制，不依賴抗體，因此稱為自然殺傷活性。NK細(xì)胞胞漿豐富，含有較大的嗜天青顆粒，顆粒的含量與NK細(xì)胞的殺傷活性呈正相關(guān)。NK細(xì)胞作用于靶細(xì)胞后殺傷作用出現(xiàn)早，在體外1小時、體內(nèi)4小時即可見到殺傷效應(yīng)。NK細(xì)胞的靶細(xì)胞主要有某些腫瘤細(xì)胞（包括部分細(xì)胞系）、病毒感染細(xì)胞、某些自身組織細(xì)胞（如血細(xì)胞）、寄生蟲等，因此NK細(xì)胞是機體抗腫瘤、抗感染的重要免疫因素，也參與第Ⅱ型超敏反應(yīng)和移植物抗宿主反應(yīng)。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；
2、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L；
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂?。?/p>
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液；
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞；
2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進行分瓶試驗；
4、長期培養(yǎng)時，淋巴細(xì)胞中要加入生長因子，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清，以利細(xì)胞生長；
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次；
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時才能進行。
方法簡介：
公司實驗室分離的人外周血NK采用取外周血、通過密度梯度離心、差速貼壁、細(xì)胞因子誘導(dǎo)法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的人源NK經(jīng)CD56免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含IL-2、IL-15、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 懸浮
細(xì)胞形態(tài) 短梭形
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)優(yōu)良
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞傳代及凍存：
| 細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
| 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
兔抗糖蛋白抗體試劑盒 兔抗糖蛋白抗體試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 兔抗糖蛋白抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔抗糖蛋白抗體試劑盒、兔抗糖蛋白抗體試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。
兔抗平滑肌抗體試劑盒 兔抗平滑肌抗體試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 兔抗平滑肌抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔抗平滑肌抗體試劑盒、兔抗平滑肌抗體試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。
兔抗試劑盒 兔抗試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 兔抗試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔抗試劑盒、兔抗試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。
兔抗腦組織抗體試劑盒 兔抗腦組織抗體試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 兔抗腦組織抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔抗腦組織抗體試劑盒、兔抗腦組織抗體試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。
小鼠KN-62 試劑盒 96T/48T
Rat dehydroepiandrosterone sulfate (DHEA-S) ELISA Kit 大鼠脫氫表雄酮酯(DHEA-S)試劑盒
Humangrowthhormonereleasinghormone,GHRHELISAKit 人促生長激素釋放激素(GHRH)試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanCollageypeⅣ,ColⅣ試劑盒人Ⅳ型膠原(ColⅣ)試劑盒規(guī)格：96T/48T
組織5-焦0酸甲戊二羥酸脫羧酶(mevalonate5-pyrophosphatedecarboxylase)活性比色法定量試劑盒20次
humaeceptoNFRSF-ieractingserine-threoninekinase2,RIPK2ELISAKit人受體TNFRSF結(jié)合絲蘇激酶2(RIPK2)試劑盒規(guī)格：96T/48T
B淋巴細(xì)胞白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子3抗體
富含亮重復(fù)蛋白8B抗體
GAD2重組小鼠 GAD65 / GAD2 蛋白 Protein
骨成型蛋白4(BMP4)重組蛋白 Recombinant Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4)
SHPK重組人 CARKL / SHPK 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
HMGB1 Protein Human 重組人 HMGB1 / HMG1 蛋白
TNFRSF9 Protein Canine 重組狗 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
lamin A 核纖層蛋白A抗原 0.5mglamin A 核纖層蛋白A抗原
HMGB1 Protein Human 重組人 HMGB1 / HMG1 蛋白
REG1A重組食蟹猴 REG1A / PSPS 蛋白 Protein
IgG2b Protein Mouse 重組小鼠 IgG2b-Fc 蛋白
SELL重組人 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 Protein
人源NK細(xì)胞大鼠鞘醇-1-0酸0酸酶1(SGPP1)試劑盒 ，英文名： SGPP1 ELISA Kit
Mouse angiopoietin 4 (ANG-4) ELISA Kit 小鼠血管生成素4(ANG-4)試劑盒
Ratmyelinbasicprotein,MBPELISAKit 大鼠髓0脂堿性蛋白(MBP)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforGS(HumanGelsolin)ELISAKit人凝溶膠蛋白
細(xì)胞單胺氧化酶(MAO)總活性熒光定量試劑盒20次
Rati-iodothyronine,T3ELISAKit大鼠三甲狀腺原(T3)試劑盒規(guī)格：96T/48T
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