化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
商品屬性：
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
股骨、脛骨 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X7064 |
細(xì)胞簡介：
兔骨內(nèi)膜間充質(zhì)干分離自股骨、脛骨；骨內(nèi)膜是一層致密結(jié)締組織膜，覆蓋在骨的表面（關(guān)節(jié)面除外），新鮮骨內(nèi)膜呈粉紅色，含有豐富的血管、神經(jīng)和成骨細(xì)胞。此外，附著于骨的肌腱、韌帶于附著部位都與骨內(nèi)膜編織在一起。因而骨內(nèi)膜與骨質(zhì)結(jié)合甚為牢固。骨內(nèi)膜富含血管、神經(jīng)，通過骨質(zhì)的滋養(yǎng)孔分布于骨質(zhì)和骨髓。骨內(nèi)膜分內(nèi)、外兩層，外層主要是粗大的膠原纖維束，部分纖維穿入骨質(zhì)，使骨內(nèi)膜固定于骨面；內(nèi)層疏松，含成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞（分別具有產(chǎn)生新骨質(zhì)和改建骨的功能）。骨髓腔和骨松質(zhì)的網(wǎng)眼也襯著一層菲薄的結(jié)締組織膜，叫做骨膜。骨內(nèi)膜的內(nèi)層和骨膜有分化成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的能力，以形成新骨質(zhì)和破壞、改造已生成的骨質(zhì)，所以對(duì)骨的發(fā)生、生長、修復(fù)等具有重要意義。骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞是一種具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細(xì)胞，可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞。骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件要求較高，在培養(yǎng)過程中，受貼壁時(shí)間、種植密度、血清含量、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響。
方法簡介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔骨內(nèi)膜間充質(zhì)干采用沖洗骨髓、消化骨內(nèi)膜、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔骨內(nèi)膜間充質(zhì)干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)優(yōu)良
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞傳代及凍存：
| 細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
| 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)ELISAKit ELISA.
小鼠白介素1α(IL-1α)ELISAKit ELISA.
小鼠白介素2(IL-2)ELISAKit ELISA.
小鼠白介素4(IL-4)ELISAKit ELISA.
小鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA 試劑盒
Human varicella zoster virus IgM (VZV-IgM) ELISA Kit 人水痘帶狀皰疹病毒IgM(VZV-IgM)試劑盒
HumanFibrinogen,FbgELISAKit 人血纖蛋白原(Fbg)試劑盒 進(jìn)口分裝
HumanAi-ypsin,AT試劑盒人抗(AT)試劑盒
植物氧化應(yīng)激活性氧(ROS)比色法定量試劑盒(羥自由基)20次
humananGSlaminase2Cpolypeptide，TGM2ELISAKit人轉(zhuǎn)酶2C多肽(TGM2)試劑盒
mRNA前體剪接因子PRPF8抗體
角蛋白相關(guān)蛋白KCP2抗體
FCGR1重組小鼠 CD64 / FCGR1 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽) Protein
ADCY1 peptide 腺苷酸環(huán)化酶1多肽抗原 0.5mgADCY1 peptide 腺苷酸環(huán)化酶1多肽抗原
SAA4重組人 SAA4 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein
FCGR2B Protein Human 重組人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽)
EGFR Protein Rat 重組大鼠 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
成纖維細(xì)胞生長因子9(FGF9)重組蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 9 (FGF9)
FCGR2B Protein Human 重組人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽)
ENTPD1重組小鼠 CD39 / ENTPD1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
SELL Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白
CD300LG重組人 CLM-9 / TREM4 / CD300LG 蛋白 Protein
兔骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞大鼠酶Ⅱ(CA2)試劑盒 ，英文名： CA2 ELISA Kit
Mouse glucocoicoid receptor alpha (GR- alpha) ELISA Kit 小鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α)試劑盒
RatThyroidStimulatingHormone,TSHELISAKit 大鼠促甲狀腺素(TSH)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHLA-E(HumanleukocyteaigenE)ELISAKit人類白細(xì)胞抗原E
細(xì)胞PKG-II激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitCRP大鼠C反應(yīng)蛋白
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L；
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂??；
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液；
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞；
2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行；
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進(jìn)行分瓶試驗(yàn)；
4、長期培養(yǎng)時(shí)，淋巴細(xì)胞中要加入生長因子，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清，以利細(xì)胞生長；
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次；
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
化工儀器網(wǎng)