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詳細介紹
商品屬性：
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
大隱靜脈組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 內(nèi)皮細胞樣 | YS-01X7287 |
細胞簡介：
小鼠大隱靜脈內(nèi)皮分離自大隱靜脈；大隱靜脈起于足背靜脈弓內(nèi)側(cè)端，經(jīng)內(nèi)踝前方，沿小腿內(nèi)側(cè)緣伴隱神經(jīng)上行，經(jīng)股骨內(nèi)側(cè)髁后方，進入大腿內(nèi)側(cè)部，與股內(nèi)側(cè)皮神經(jīng)伴行，逐漸向前上，在恥骨結(jié)節(jié)外下方穿隱靜脈裂孔，匯入股靜脈，其匯入點稱為隱股點。有5條屬支：旋髂淺靜脈、腹壁淺靜脈、外靜脈、股內(nèi)側(cè)淺靜脈和股外側(cè)淺靜脈，它們匯入大隱靜脈的形式多樣，相互間吻合豐富。大隱靜脈曲張行高位結(jié)扎時，須分別結(jié)扎、切斷各屬支，以防復(fù)發(fā)。大隱靜脈內(nèi)皮細胞對維持大隱靜脈動態(tài)平衡起著重要作用。它們合成、分泌凝血和纖溶系統(tǒng)的激活因子和抑制因子、影響血小板粘附和聚集的調(diào)節(jié)因子；大隱靜脈內(nèi)皮細胞還釋放控制細胞增殖和調(diào)節(jié)血管壁緊張度的分子。
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠大隱靜脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的小鼠大隱靜脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞傳代及凍存：
| 細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
| 如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
總合成酶（NOS）測試盒[測總NOS（T－NOS）]
（NO）測定試劑盒（微板法）
（NO）測定試劑盒（還原酶法）
ATP酶測試盒（測普通組織勻漿的Na+K+、Ca2+Mg2+－ATP酶，樣本前處理不需高速離心）
豬組胺(HIS)ELISA 試劑盒
Human lipid peroxide / lactoperoxidase (LPO) ELISA Kit 人過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO)試劑盒
RabbitThrombinactivatablefibrinolysisinhibitor,TAFIELISAKit 兔纖溶抑制因子/激活的纖溶抑制物(TAFI)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforApo-E(MouseApolipoproteinE)ELISAKit小鼠載脂蛋白E
溴脫氧尿核苷(BrdU)溶液(1毫摩爾)1毫升
PorcineMelatonin,MTELISAKit豬褪黑素(MT)試劑盒
NDUFAF1蛋白抗體
先天性紅細胞生成異常性貧血蛋白1抗體
IL12A & IL12B重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein
Lin-28同源物A(LIN28A)重組蛋白 Recombinant Lin-28 Homolog A (LIN28A)
RCN3重組人 RCN3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
C1QBP Protein Human 重組人 HABP1 / C1QBP / GC1QBP 蛋白 (His 標(biāo)簽)
GPT Protein Rat 重組大鼠 GPT1 / GPT 蛋白 (His 標(biāo)簽)
癌胚抗原(CEA)重組蛋白 Recombinant Carcinoembryonic Antigen (CEA)
C1QBP Protein Human 重組人 HABP1 / C1QBP / GC1QBP 蛋白 (His 標(biāo)簽)
BCAM重組小鼠 BCAM 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
FGFR1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 FGFR1 / CD331 蛋白 (His 標(biāo)簽)
GSTZ1重組人 GSTZ1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
小鼠大隱靜脈內(nèi)皮細胞大鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)試劑盒 ，英文名： NF-κB p65 ELISA Kit
Rabbit heat shock protein 40 (HSP-40) ELISA Kit 兔熱休克蛋白40(HSP-40)試劑盒
麻疹病毒(MV)核酸試劑盒(-PCR法) 48T
CLIAKitforMouseBeta-Defensins,Beta-DFELISAKit小鼠β-防御素
體液肌酸激酶(CK)總活性比色法定量試劑盒25次
ELISAKit1,3-βDglucosidase人1,3-βD葡葡糖苷酶
原代細胞的培養(yǎng)條件：
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；
2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落，漂?。?/p>
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細胞換液；
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞；
2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進行分瓶試驗；
4、長期培養(yǎng)時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行
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