詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
產(chǎn)品名稱:小鼠胚胎干細(xì)胞
組織來(lái)源:囊胚
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
包被條件 明膠(0.1%)
培養(yǎng)基 含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次;
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 短梭形、多角形
傳代特性 可傳5-8代左右
消化液 0.025%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠胚胎干分離自囊胚胚胎組織;胚胎干細(xì)胞(Embryonic stem cell,ESCs,簡(jiǎn)稱ES、EK或ESC細(xì)胞)是早期胚胎(原腸胚期之前)或原始性腺中分離出來(lái)的一類細(xì)胞,它具有體外培養(yǎng)無(wú)限增殖、自我更新和多向分化的特性。無(wú)論在體外還是體內(nèi)環(huán)境,ES細(xì)胞都能被誘導(dǎo)分化為機(jī)體幾乎所有的細(xì)胞類型。進(jìn)一步說(shuō),胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)是一種高度未分化細(xì)胞。它具有發(fā)育的全能性,能分化出成體動(dòng)物的所有組織和器官,包括生殖細(xì)胞。ES細(xì)胞具有與早期胚胎細(xì)胞相似的形態(tài)結(jié)構(gòu),細(xì)胞核大,有一個(gè)或幾個(gè)核仁,胞核中多為常染色質(zhì),胞質(zhì)胞漿少,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。體外培養(yǎng)時(shí),細(xì)胞排列緊密,呈集落狀生長(zhǎng)。用堿性磷酸酶染色,ES細(xì)胞呈棕紅色,而周圍的成纖維細(xì)胞呈淡黃色。細(xì)胞克隆和周圍存在明顯界限,形成的克隆細(xì)胞彼此界限不清,細(xì)胞表面有折光較強(qiáng)的脂狀小滴。細(xì)胞克隆形態(tài)多樣,多數(shù)呈島狀或巢狀。小鼠ES細(xì)胞的直徑7 微米~18 微米,豬、牛、羊ES細(xì)胞的顏色較深,直徑12 微米~18 微米。胚胎干細(xì)胞與普通細(xì)胞有顯著差別,有其特定的生長(zhǎng)特性和特定的標(biāo)志,例如堿性磷酸酶活性非常高,帶有胚胎階段特異性表面抗原( Stage- specific embryonic antigens,SSEA),人類胚胎干細(xì)胞還帶有高分子量的糖蛋白TRA1-60、TRA-1-81等標(biāo)志,這些特性和標(biāo)志均可以用于對(duì)胚胎干細(xì)胞進(jìn)行鑒定,除此之外,胚胎干細(xì)胞還可以在體外傳代,并保持正常核型。在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因子( Leukaemia inhibitory factor,LF)或者在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層(MEF)上培養(yǎng)時(shí),胚胎干細(xì)胞都能呈克隆性增殖,長(zhǎng)期保持核型正常和穩(wěn)定,凍存解凍也不影響不分化的特性。另外,胚胎干細(xì)胞還表現(xiàn)岀高水平端粒酶活性,目前證明端粒酶與細(xì)胞衰老密切相關(guān),多數(shù)成熟細(xì)胞的端粒酶活性都很低。這些都是胚胎干細(xì)胞與成熟細(xì)胞不同的重要特點(diǎn),也可能是其復(fù)制生命期限遠(yuǎn)比體細(xì)胞長(zhǎng)的原因。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎干采用分離囊胚組織,去除胚胎透明帶、使用特制專用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng),消化傳代純化制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎干經(jīng)Oct-4免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)步驟:
一、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
二、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a)、對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b)、對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠胰島細(xì)胞抗體試劑盒 小鼠胰島細(xì)胞抗體試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 小鼠胰島細(xì)胞抗體試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠胰島細(xì)胞抗體試劑盒、小鼠胰島細(xì)胞抗體試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
小鼠血小板膜糖蛋白試劑盒 小鼠血小板膜糖蛋白試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 小鼠血小板膜糖蛋白試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠血小板膜糖蛋白試劑盒、小鼠血小板膜糖蛋白試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
小鼠血管生成素試劑盒 小鼠血管生成素試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 小鼠血管生成素試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠血管生成素試劑盒、小鼠血管生成素試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子試劑盒 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子試劑盒、小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
小鼠血管舒緩激肽(BK)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human leukocyte aigen G (HLA-G) ELISA Kit 人類白細(xì)胞抗原G(HLA-G)試劑盒
Humaniduronatesulfatase,IDSELISAKit 人艾杜糖硫酸酯酶(IDS)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
抗抗體IgG(間接法二步法)
優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間(ELT)試劑盒20次
MouseIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISAKit小鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)試劑盒規(guī)格:96T/48T
INT11蛋白抗體
E3泛素連接酶MUL1抗體
S100A1重組人 S100A1 蛋白 Protein
血小板反應(yīng)蛋白(THBS1)重組蛋白 Recombinant Thrombospondin 1 (THBS1)
HA重組甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein
CD3E Protein Human 重組人 CD3e / CD3 epsilon 蛋白
GLYCOPROTEIN Protein Sudan ebolavirus 重組蘇丹埃博拉病毒 Glycoprotein / GP 蛋白
血小板反應(yīng)蛋白(THBS1)重組蛋白 Recombinant Thrombospondin 1 (THBS1)
CD3E Protein Human 重組人 CD3e / CD3 epsilon 蛋白
S100A1重組人 S100A1 蛋白 Protein
GLYCOPROTEIN Protein Sudan ebolavirus 重組蘇丹埃博拉病毒 Glycoprotein / GP 蛋白
HA重組甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein
小鼠胚胎干細(xì)胞大鼠鈣調(diào)0酸酶(CaN)試劑盒 ,英文名: CaN ELISA Kit
Porcine cholecystokinin / cholecystokinin (CCK) ELISA Kit 豬膽囊收縮素/腸促肽(CCK)試劑盒
轉(zhuǎn)基因植物NPTⅡ基因核酸試劑盒 48T
CLIAKitforMCP-2/CCL8ELISAKit大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白2
體液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶(ACE)總活性比色法定量試劑盒20次
ELISAKitP27貓p27核心抗原
收到細(xì)胞如何處理?
1、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)拍照,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%,可正常傳代;若未超過(guò)80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過(guò)80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過(guò)80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作