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酶標儀的原理
閱讀：1602 發(fā)布時間：2021-9-3
酶標儀的原理
酶標儀即酶聯(lián)免疫檢測儀，是酶聯(lián)免疫吸附試驗的專用儀器?？珊唵蔚胤譃榘胱詣雍腿詣?大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個比色計，即用比色法來分析抗原或抗體的含量。
酶聯(lián)免疫吸附試驗方法簡稱酶標法，是標記技術(shù)中的一種，是從熒光抗體技術(shù)，同位素免疫技術(shù)發(fā)展而來的一種敏感，特異，快速并且能自動化的現(xiàn)代技術(shù)。
酶標法的基本原理是將抗原或抗體與酶用膠聯(lián)劑結(jié)合為酶標抗原或抗體，此酶標抗原或抗體可與固相載體上或組織內(nèi)相應抗原或抗體發(fā)生特異反應，并牢固地結(jié)合形成仍保持活性的免疫復合物。當加入相應底物時，底物被酶催化而呈現(xiàn)出相應反應顏色。顏色深淺與相應抗原或抗體含量成正比。
由于此技術(shù)是建立在抗原-抗體反應和酶的高效催化作用的基礎(chǔ)上，因此，具有高度的靈敏性和特異性，是一種極富生命力的免疫學試驗技術(shù)。
酶標儀就是應用酶標法原理的儀器，酶標儀類似于一臺變相光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計基本相同。
光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，進入塑料微孔極中的待測標本.該單色光一部分被標本吸收，另一部分則透過標本照射到光電檢測器上，光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應的電信號，電信號經(jīng)前置放大，對數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進行數(shù)據(jù)處理和計算，Z后由顯示器和打印機顯示結(jié)果。
微處理機還通過控制電路控制機械驅(qū)動機構(gòu)X方向和Y方向的運動來移動微孔板，從而實現(xiàn)自動進樣檢測過程。而另一些酶標儀則是采用手工移動微孔板進行檢測，因此省去了X，Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu)和控制電路，從而使儀器更小巧，結(jié)構(gòu)也更簡單。
微孔板是一種經(jīng)事先包理專用于放置待測樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內(nèi)都包埋著相應的抗原或抗體，微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液。其常見規(guī)格有40孔板，55孔板，96孔板等多種，不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板，對其可進行一孔一孔地檢測或一排一排地檢測。
酶標儀測定是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。隨著檢測方式的發(fā)展，擁有多種檢測模式的單體臺式酶標儀叫做多功能酶標儀，可檢測吸光度(Abs)、熒光強度(FI)、時間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)、和化學發(fā)光(Lum)。
酶標儀從原理上可以分為光柵型酶標儀和濾光片型酶標儀。光柵型酶標儀可以截取光源波長范圍內(nèi)的任意波長，而濾光片型酶標儀則根據(jù)選配的濾光片，只能截取特定波長進行檢測。
酶標儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得，也可用分光光度計相同的單色器來得到。在使用濾光片作濾波裝置時與普通比色計一樣，濾光片即可放在微孔板的前面，也可放在微孔板的后面，其效果是相同的。光源燈發(fā)出的光經(jīng)聚光鏡，光欄后到達反射鏡，經(jīng)反射鏡作90°反射后垂直通過比色溶液，然后再經(jīng)濾光片送到光電管。
酶標儀可分為單通道和多通道2種類型，單通道又有自動和手動2種之分。自動型的儀器有X，Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu)，可將微孔板L的小孔一個個依次送入光束下面測試，手動型則靠手工移動微孔板來進行測量。
在單通道酶標儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標儀，此類酶標儀一般都是自動化型的。它設(shè)有多個光束和多個光電檢測器，如12個通道的儀器設(shè)有12條光束或12個光，12個檢測器和12個放大器，在X方向的機械驅(qū)動裝置的作用下，樣品12個為一排被檢測。多通道酶標儀的檢測速度快，但其結(jié)構(gòu)較復雜價格也較高。
酶標儀的原理
多功能酶標儀指擁有多種檢測模式的單體臺式酶標儀。通常具有比色皿插槽，可檢測吸光度(Abs)、熒光強度(FI)、時間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)、和化學發(fā)光(Lum)?？蓪σ晕⒖装鍨轶w系的實驗提供多種不同模式的檢測。通常，多功能酶標儀至少可提供“吸收光"“、熒光"“、發(fā)光"三種不同的檢測模式。一些中多功能酶標儀還可完成“時間分辨熒光"“、熒光偏振"“、熒光共振能量轉(zhuǎn)移"等高級熒光檢測實驗。該儀器適用于臨床檢驗、微生物學、流行病學、免疫學、內(nèi)分泌學以及農(nóng)林科學等領(lǐng)域。廣泛用于醫(yī)院、血站、防疫站、生物制品等部門。
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