細胞培養(yǎng)常用設(shè)備和實驗技巧

常用設(shè)備

準備室的設(shè)備：

單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜（放置未消毒物品）、儲品規(guī)（放置消毒過的物品）、包裝臺。

配液室的設(shè)備：

扭力天平和電子天平（稱量藥品）、PH計（測量培養(yǎng)用液PH值）、磁力攪拌器（配置溶液室攪拌溶液）。

培養(yǎng)室的設(shè)備：

液氮罐、儲品柜（存放雜物）、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱（-80℃）、空調(diào)、二氧化碳缸瓶、邊臺（書寫實驗記錄）。必須放在無菌間的設(shè)備：離心機（收集細胞）、超凈工作臺、倒置顯微鏡、CO2孵箱（孵育培養(yǎng)物）、水浴鍋、三氧消毒殺菌機、4℃冰箱（放置serum和培養(yǎng)用液）。

無菌操作

無菌室的滅菌：

1.定期打掃無菌室：每周打掃一次，先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等，然后用3‰來蘇爾或者新潔爾滅或者0.5%過氧乙酸擦拭。

2.CO2孵箱（培養(yǎng)箱）滅菌：先用3‰新潔爾滅擦拭，然后用75%酒精擦拭或者0.5%過氧乙酸，再用紫外燈照射。

3.實驗前滅菌：打開紫外燈、三氧殺菌機、空氣凈化器系統(tǒng)各20～30分鐘。

4.實驗后滅菌：用75%酒精（3‰新潔爾滅）擦拭超凈臺、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺。

實驗人員的無菌準備：

1.肥皂洗手。

2.穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋 。

3.用75%酒精棉球擦凈雙手。

無菌操作的演示：

1.凡是帶入超凈工作臺內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面 。

2.靠近酒精燈火焰操作。

3.器皿使用前必須過火滅菌。

4.繼續(xù)使用的器皿（如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時仍要過火。

5.各種操作要靠近酒精燈，動作要輕、準確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。

6.吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管，防止交叉污染。

器械的清洗和消毒

玻璃器械洗消：

一、新的玻璃器皿的洗消：

1.自來水刷洗，除去灰塵。

2.烘干、泡鹽酸：烤箱中烘干，然后再浸入5%稀鹽酸中12小時以除去臟物、鉛、砷等物。

3.刷洗、烘干：12小時后立即用自來水沖洗，再用洗滌劑刷洗，自來水沖干凈后用烤箱烘干。

4.泡酸、清洗：用清潔液（重鉻酸鉀120g：濃硫酸200ml：蒸餾水1000ml）浸泡12小時，然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來水沖洗15次，最后蒸餾水沖洗3～5次和用雙蒸水過3次。