實時熒光定量PCR,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板,從而進(jìn)入平臺期。將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋進(jìn)行Real Time PCR,按照起始DNA量由多到少的順序等間隔得到一系列擴(kuò)增曲線。Ct值與起始模板數(shù)的對數(shù)值之間存在線性關(guān)系,可以制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。未知濃度的樣品也得到Ct值,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,就可以求出未知樣品的起始模板量。
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