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ELISA 抗體如何選擇?

時間：2023/8/29閱讀：941

在ELISA 實驗過程中，抗原和抗體的質(zhì)量是實驗是否成功的關鍵因素。要求所用抗原純度高，抗體效價高、親和力強.

抗單克隆或多克隆抗體都可以用作夾心ELISA系統(tǒng)中的捕獲和檢測抗體。單克隆抗體對單個表位具有固有的特異性，可以對抗原的微小差異進行精細檢測和定量。多克隆抗體通常用作捕獲抗體，然后，在夾心ELISA檢測中將單克隆抗體用作檢測抗體，以提供更高的特異性。除了使用傳統(tǒng)的單克隆抗體外，重組單克隆抗體也可用于ELISA。例如，免重組抗體衍生自產(chǎn)生抗體的細胞系，該細胞系經(jīng)過改造可表達特定的抗體重鏈和輕鏈DNA序列。與衍生自雜交瘤的傳統(tǒng)單克隆抗體相比，重組抗體不易受細胞系漂移或批次間差異的影響，因此可實現(xiàn)峰值抗原特異性。

選擇抗體的另一個設計考慮因素是成本。生產(chǎn)多克隆抗體通常比單克隆抗體便宜(約5倍)。必須權衡通過將單克隆抗體同時用于捕獲和檢測抗體獲得的特異性與生產(chǎn)兩種單克隆抗體所需的成本和時間的權衡。另外，準備“自夾心" ELISA分析(使用相同的抗體進行捕獲和檢測)可能會限制最終ELISA的動態(tài)范圍和靈敏度。

1) 重組免單克隆抗體: 抗體源自可生成免單克隆抗體的細胞系，并通過分離及克隆特定抗體的重鏈和輕鏈 DNA 序列而產(chǎn)生。ABfinity 單克隆抗體產(chǎn)自克隆文庫分離出的單一克隆。

優(yōu)勢: a.具有兔單抗的高特異性和高靈敏性

b.重組生產(chǎn)，批次間穩(wěn)定一致

c.只結合單個表位的單克隆抗體

d.無動物源生產(chǎn)

e.儲存 DNA 庫而非細胞庫

注意事項: a.無多表位結合

2) 重組兔寡克隆抗體:

優(yōu)勢: a.具有免抗體的高特異性和高靈敏性

b.重組生產(chǎn)，批次間穩(wěn)定一致

c.通過DNA文庫表達生產(chǎn)的多表位結合位點

d.無動物源

e.儲存DNA庫而非細胞庫

注意事項:a無單表位結合b.由于多表位結合，可能觀察到更多交叉反應性

3) 噬菌體展示重組單克隆抗體:

噬體展示重組單克隆抗體，經(jīng)由編碼抗體可變區(qū)的 DNA 序列跟編碼包膜蛋白的噬菌體基因融合后表達。因此，噬菌體包膜在其表面表達抗體融合蛋白

優(yōu)勢: a重組生產(chǎn)帶來的批次間一致性b，單表位結合c.無動物源生產(chǎn)d.儲存 DNA庫而非細胞庫

注意事項: 噬菌體展示抗體相比動物源抗體可能親和性更低b.噬菌體展示抗體缺少糖基化c.無多表位結合

4)單克隆抗體:

單克隆抗體源自雜交瘤細胞。它們的生產(chǎn)包括接種動物(經(jīng)常用的是小鼠)，分離其脾細胞，然后同親本細胞融合。所得雜交瘤細胞經(jīng)過表征后篩選克隆用于抗體生產(chǎn)

優(yōu)勢:

單克隆雜交瘤細胞系生產(chǎn)，批次間穩(wěn)定一致

b，單表位結合

注意事項:

a隨著時間推移單克隆抗體會呈現(xiàn)細胞漂移b.無多表位結合c.需要考慮單克隆抗體的同型特異性

5) 免單克隆抗體: 兔單克隆抗體源自雜交瘤細胞。它們的生產(chǎn)包括接種兔，分離其脾細胞，然后同親本細胞融合。所得雜交瘤細胞經(jīng)過表征后篩選克隆用于抗體生產(chǎn)

優(yōu)勢:

具有兔全部天然抗體庫帶來的高特異性

b.單表位結合

c.兔中的單個同種型

注意事項:

隨著時間推移，兔雜交瘤比小鼠雜交瘤更快呈現(xiàn)細胞漂移 (cell-line drift)b.無多表位結合

6)多克隆抗體:

多克隆抗體源自動物免疫產(chǎn)生的 B 細胞。抗體從動物血清純化，包括結合抗原上不同表位的多種抗體。

優(yōu)勢;

a多表位結合

b.使用全部天然抗體庫帶來的高特異性

注意事項:

a每次動物免疫會造成批次間差異性 b.無單表位結合由于多表位結合，更有可能觀察到交叉反應性

二抗:

二抗是指用于靶向結合一抗的抗體。再多種免疫印跡、ELISA以及免疫熒光等免疫實驗中，二抗經(jīng)常和一抗結合使用以檢測目標蛋白。很多二抗都帶有標記物，例如Alexa Fluor熒光染料或辣根過氧化物酶（HRP）,從而使二抗的信號可以被檢測到。

實驗中也可以使用帶有標記物的一抗，但是二抗有很多優(yōu)點。無論是使用哪種一抗進行檢測，使用二抗可便于更換不同的標記物。例如，同樣的一抗可以與HRP標記二抗一起用于免疫印跡，也可以與另一種Alexa Fluor 488英光標記二抗一起用于免疫熒光實

驗

另外，二抗結合在抗原位置的標記染料比直標一抗要多，從而增強檢測信號。使用二抗可以避免對一抗進行復雜且昂貴的化學標記(偶聯(lián))，而且偶聯(lián)反應 (具有氨基酸特異性)可能干擾一抗對抗原的識別。

選擇最佳的二抗要考慮以下因素: a.種屬來源和種屬反應性 b.特異性反應c.純化方法d.交叉吸附e.多重檢測能力f，抗體類型和亞型g.完整抗體還是抗體片段h.標記物i.生物素結合蛋白

抗體對:

由于抗體的選擇對實驗的影響比較大，所以我們建議選擇配對的抗體進行ELISA實驗，配對抗體指的是可以同時結合在一個抗原分子上的兩個抗體。配對抗體，一般應用于夾心ELISA實驗。配對抗體的制備與篩選過程復雜，即使兩個抗體針對的是不同的抗原決定簇，也并不意味著這兩個抗體分子一定可以同時與抗原分子結合。當一個抗體與抗原結合后，有可能會導致其他結合位點(抗原決定族)構型的改變，從而導致其他的抗體無法正常結合到抗原上。位阻效應的存在，也可能使兩個結合位點距離較近的抗本無法同時結合在抗原上。因此想要得到可以同時結合在抗原分子上的配對抗體，在制備出抗體后，還需要對得到的抗體進行篩選。因此我們建議選擇制備與篩選好的，已經(jīng)過測試的匹配抗體對產(chǎn)品進行ELISA實驗，確保實驗的準確性。

品牌Thermo Fisher

ELISA抗體對產(chǎn)品

名稱 IL-6 Human Matched Antibody Pair 貨號 CHC1263 10X96 T

名稱IL-4 Human Matched Antibody Pair 貨號CHC1283 10X96 T

名稱IL-8 Human Matched Antibody Pair 貨號CHC1303 10X96 T

名稱IL-2 Human Matched Antibody Pair貨號CHC1243 10X96 T

名稱IL-10 Human Matched Antibody Pair貨號CHC1323 10X96 T

名稱IL-12 p70 Human Matched Antibody Pair貨號CHC1563 10X96 T

名稱IL-1 beta Human Matched Antibody Pair貨號CHC1213 10X96 T

名稱MMP3 Human Matched Antibody Pair貨號CHC1543 10X96 T

名稱IL1RA Human Matched Antibody Pair 貨號CHC1183 10X96 T

名稱CXCL10 Human Matched Antibody Pair 貨號CHC2363 10X96 T

大鼠

名稱IL -6 Rat Matched Antibody Pair 貨號CRC0063 10X96 T

名稱IL-4 Rat Matched Antibody Pair 貨號BMS628MST 10X96 T

小鼠

名稱IP-10/CXCL10 Mouse Matched Antibody Pair 貨號BMS6018MST 10X96T

名稱IL-13 Mouse Matched Antibody Pair 貨號CMC2223 10X96 T

豬

名稱IL10 Porcine Matched Antibody Pail 貨號CSC0103 10X96 T

名稱IL-2 Porcine Matched Antibody Pair 貨號CSC1243 10X96 T

猴

名稱ICAM-1(Soluble) Monkey Matched Antibody Pair貨號BMS648MST 10X96T

名稱TNF alpha Monkey Matched Antibody Pair 貨號BMS654MST 10X96 T

雞

名稱IFN gamma Chicken Matched Antibody Pair貨號CAC1233

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