worthington-biochem的膠原酶

時(shí)間：2024/1/9閱讀：534

粗制膠原酶制劑含有兩種不同膠原酶的幾種亞型：一種巰基蛋白酶、梭菌蛋白酶、一種胰蛋白酶樣酶和一種氨肽酶。這種膠原蛋白水解和蛋白水解活性的結(jié)合可有效分解細(xì)胞間基質(zhì)，這是組織解離的重要部分。該復(fù)合物的一個(gè)成分是水解酶，它優(yōu)先降解序列 Pro-Y-Gly-Pro 中的 Y-Gly 鍵處的天然膠原蛋白的螺旋區(qū)域，其中 Y 最常見的是中性氨基酸。這種裂解產(chǎn)生的產(chǎn)物易于進(jìn)一步被肽酶消化。粗膠原酶會(huì)被半胱氨酸、EDTA 或鄰菲咯啉等金屬螯合劑抑制，但 DFP 不會(huì)。它還受到α2-巨球蛋白（一種大的血漿糖蛋白）的抑制。Ca2+ 是酶活性所必需的。每種膠原酶的特定酶譜與獲得研究細(xì)胞的組織（或與細(xì)胞的用途）相關(guān)，并且由于這種相關(guān)性，沃辛頓建立了幾種類型的粗制膠原酶：類型 1、2、3 和 4。

• 1 型粗膠原酶具有膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。
• 2 型含有較高相對(duì)水平的蛋白酶活性，特別是梭菌蛋白酶。
• 3 型含有很低水平的次級(jí)蛋白酶。
• 4 型的胰蛋白酶活性特別低，以限制對(duì)膜蛋白和受體的損害。
• 5 型 含有較高的膠原酶和酪蛋白酶值。
• 6 型 含有高膠原酶活性，酪蛋白酶與膠原酶的比例約為 2:1。相對(duì)于 I 型 ( G列 ) 而言，旨在富集 II 型 ( H列 ) 膠原酶。
• 7 型 膠原酶和酪蛋白酶活性比 1 型和 2 型膠原酶高四倍。

•純化的膠原酶，代碼：CLSPA，含有極低的次級(jí)蛋白水解活性以及高膠原酶活性。

新的！ 無(wú)動(dòng)物類型 AFA、AFB 和 AFC、STZ1 和 STZ2膠原酶源自在q不含動(dòng)物成分的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的培養(yǎng)物，專為必須防止引入潛在動(dòng)物源性病原體的生物加工應(yīng)用而設(shè)計(jì)。次級(jí)蛋白酶的水平與 1 型和 2 型膠原酶相似。

CLSAFA 是最初的 AFA 等級(jí)，設(shè)計(jì)具有類似于 1 型和 2 型膠原酶的膠原酶和次級(jí)蛋白酶。
CLSAFB 比 CLSAFA 含有更高的膠原酶和酪蛋白酶活性。
CLSAFC 具有與 4 型膠原酶相似的特別低的胰蛋白酶活性。
CLSAFD 的比活性比 CLSAFA 高兩到三倍
純化的膠原酶（代碼CLSAFP）含有最少的次級(jí)蛋白水解活性以及高膠原酶活性。
STZ1 和 STZ2，0.22μ過(guò)濾的STEMxyme ® AOF 膠原酶/中性蛋白酶 (Dispase®) 混合物，用于原代細(xì)胞和干細(xì)胞分離。

Worthington 還提供每種類型的 0.22 µm 過(guò)濾制劑，以預(yù)包裝形式直接重構(gòu)并用于細(xì)胞分離和培養(yǎng)程序。酶類型和不同組織的有效性之間的相關(guān)性良好，但并不很好，部分原因是使用參數(shù)的可變性。盡管如此，大多數(shù)研究人員認(rèn)為粗制膠原酶批次的組織分型是一項(xiàng)有價(jià)值的服務(wù)。關(guān)于沃辛頓膠原酶和污染物測(cè)定的詳細(xì)說(shuō)明可以在沃辛頓酶手冊(cè)中找到。此外，組織特定的參考資料和詳細(xì)的分離條件可以在《沃辛頓組織解離指南》中找到。

膠原酶測(cè)定是Mandl的改進(jìn)，其中將膠原酶與天然膠原一起溫育5小時(shí)，并且使用Moore和Stein， JBC，176，367，(1948)比色茚三酮方法測(cè)定膠原分解的程度。釋放的氨基酸以每毫克膠原酶的微摩爾亮氨酸表示。

用途：粗膠原酶廣泛用于酶促原代細(xì)胞分離和組織解離程序。大多數(shù)研究人員使用粗制膠原酶制劑，例如 1、2、3 和 4 型或色譜純化的膠原酶（代碼：CLSPA）；后者通常與彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶等輔助酶結(jié)合。為了獲得最佳結(jié)果，必須根據(jù)待解離的組織定制蛋白水解活性的精確混合物。不同組織的類型和有效性之間的相關(guān)性良好，但并不很好，并且可能部分取決于使用參數(shù)和目標(biāo)以及批次之間的差異。有關(guān)更多信息，請(qǐng)參閱膠原酶采樣計(jì)劃信息。沃辛頓還出版了《組織解離指南》，其中提供了有關(guān)用于這些應(yīng)用的酶的更多信息以及多種細(xì)胞和組織類型的具體參考。

相關(guān)產(chǎn)品：

膠原蛋白 (CL)
脫氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)
彈性蛋白酶 (ES/ESL/ESFF)
透明質(zhì)酸酶 (HSE/HSEP)
中性蛋白酶（Dispase、NPRO）
木瓜蛋白酶 (PAP/PAPL/PAP2) 蛋白酶 K (PROK)
胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS/TRTPCK)
胰蛋白酶抑制劑 (LBI/OI/SI/SIC)

細(xì)胞分離優(yōu)化系統(tǒng) (CIT)
肝細(xì)胞分離系統(tǒng) (HIS)
新生兒心肌細(xì)胞分離系統(tǒng) (NCIS)
木瓜蛋白酶解離系統(tǒng) (PDS/PDS2)

單位定義

在 37°C、pH 7.5 下，1 個(gè)單位可在 5 小時(shí)內(nèi)從膠原蛋白中釋放出 1 微摩爾的 L-亮氨酸當(dāng)量

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