worthington-biochem的膠原酶

時間：2024/1/9閱讀：755

粗制膠原酶制劑含有兩種不同膠原酶的幾種亞型：一種巰基蛋白酶、梭菌蛋白酶、一種胰蛋白酶樣酶和一種氨肽酶。這種膠原蛋白水解和蛋白水解活性的結(jié)合可有效分解細胞間基質(zhì)，這是組織解離的重要部分。該復(fù)合物的一個成分是水解酶，它優(yōu)先降解序列 Pro-Y-Gly-Pro 中的 Y-Gly 鍵處的天然膠原蛋白的螺旋區(qū)域，其中 Y 最常見的是中性氨基酸。這種裂解產(chǎn)生的產(chǎn)物易于進一步被肽酶消化。粗膠原酶會被半胱氨酸、EDTA 或鄰菲咯啉等金屬螯合劑抑制，但 DFP 不會。它還受到α2-巨球蛋白（一種大的血漿糖蛋白）的抑制。Ca2+ 是酶活性所必需的。每種膠原酶的特定酶譜與獲得研究細胞的組織（或與細胞的用途）相關(guān)，并且由于這種相關(guān)性，沃辛頓建立了幾種類型的粗制膠原酶：類型 1、2、3 和 4。

• 1 型粗膠原酶具有膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。
• 2 型含有較高相對水平的蛋白酶活性，特別是梭菌蛋白酶。
• 3 型含有很低水平的次級蛋白酶。
• 4 型的胰蛋白酶活性特別低，以限制對膜蛋白和受體的損害。
• 5 型 含有較高的膠原酶和酪蛋白酶值。
• 6 型 含有高膠原酶活性，酪蛋白酶與膠原酶的比例約為 2:1。相對于 I 型 ( G列 ) 而言，旨在富集 II 型 ( H列 ) 膠原酶。
• 7 型 膠原酶和酪蛋白酶活性比 1 型和 2 型膠原酶高四倍。

•純化的膠原酶，代碼：CLSPA，含有極低的次級蛋白水解活性以及高膠原酶活性。

新的！ 無動物類型 AFA、AFB 和 AFC、STZ1 和 STZ2膠原酶源自在q不含動物成分的培養(yǎng)基中生長的培養(yǎng)物，專為必須防止引入潛在動物源性病原體的生物加工應(yīng)用而設(shè)計。次級蛋白酶的水平與 1 型和 2 型膠原酶相似。

CLSAFA 是最初的 AFA 等級，設(shè)計具有類似于 1 型和 2 型膠原酶的膠原酶和次級蛋白酶。
CLSAFB 比 CLSAFA 含有更高的膠原酶和酪蛋白酶活性。
CLSAFC 具有與 4 型膠原酶相似的特別低的胰蛋白酶活性。
CLSAFD 的比活性比 CLSAFA 高兩到三倍
純化的膠原酶（代碼CLSAFP）含有最少的次級蛋白水解活性以及高膠原酶活性。
STZ1 和 STZ2，0.22μ過濾的STEMxyme ® AOF 膠原酶/中性蛋白酶 (Dispase®) 混合物，用于原代細胞和干細胞分離。

Worthington 還提供每種類型的 0.22 µm 過濾制劑，以預(yù)包裝形式直接重構(gòu)并用于細胞分離和培養(yǎng)程序。酶類型和不同組織的有效性之間的相關(guān)性良好，但并不很好，部分原因是使用參數(shù)的可變性。盡管如此，大多數(shù)研究人員認為粗制膠原酶批次的組織分型是一項有價值的服務(wù)。關(guān)于沃辛頓膠原酶和污染物測定的詳細說明可以在沃辛頓酶手冊中找到。此外，組織特定的參考資料和詳細的分離條件可以在《沃辛頓組織解離指南》中找到。

膠原酶測定是Mandl的改進，其中將膠原酶與天然膠原一起溫育5小時，并且使用Moore和Stein， JBC，176，367，(1948)比色茚三酮方法測定膠原分解的程度。釋放的氨基酸以每毫克膠原酶的微摩爾亮氨酸表示。

用途：粗膠原酶廣泛用于酶促原代細胞分離和組織解離程序。大多數(shù)研究人員使用粗制膠原酶制劑，例如 1、2、3 和 4 型或色譜純化的膠原酶（代碼：CLSPA）；后者通常與彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶等輔助酶結(jié)合。為了獲得最佳結(jié)果，必須根據(jù)待解離的組織定制蛋白水解活性的精確混合物。不同組織的類型和有效性之間的相關(guān)性良好，但并不很好，并且可能部分取決于使用參數(shù)和目標以及批次之間的差異。有關(guān)更多信息，請參閱膠原酶采樣計劃信息。沃辛頓還出版了《組織解離指南》，其中提供了有關(guān)用于這些應(yīng)用的酶的更多信息以及多種細胞和組織類型的具體參考。

相關(guān)產(chǎn)品：

膠原蛋白 (CL)
脫氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)
彈性蛋白酶 (ES/ESL/ESFF)
透明質(zhì)酸酶 (HSE/HSEP)
中性蛋白酶（Dispase、NPRO）
木瓜蛋白酶 (PAP/PAPL/PAP2) 蛋白酶 K (PROK)
胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS/TRTPCK)
胰蛋白酶抑制劑 (LBI/OI/SI/SIC)

細胞分離優(yōu)化系統(tǒng) (CIT)
肝細胞分離系統(tǒng) (HIS)
新生兒心肌細胞分離系統(tǒng) (NCIS)
木瓜蛋白酶解離系統(tǒng) (PDS/PDS2)

單位定義

在 37°C、pH 7.5 下，1 個單位可在 5 小時內(nèi)從膠原蛋白中釋放出 1 微摩爾的 L-亮氨酸當量

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膠原酶

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