DAB辣根過氧化物酶顯色試劑盒使用說明書

DAB辣根過氧化物酶顯色試劑盒

產(chǎn)品貨號: T15132

產(chǎn)品規(guī)格:2×50ml

產(chǎn)品簡介：

DAB 辣根過氧化物酶顯色液(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit) 是一種依據(jù)辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合顯色，用于免疫組化顯色、原位雜交顯色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜顯色的試劑盒。

DAB 即 3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride, 是辣根過氧化物酶的常用底物。在辣根過氧化物酶的催化下, DAB 會產(chǎn)生棕色沉淀。該棕色沉淀不溶于水和乙醇。因此在DAB顯色后, 還可以使用溶于乙醇的染料進行后續(xù)染色。

本顯色液可以用于細胞或組織在免疫組化或原位雜交時結(jié)合的辣根過氧化物酶顯色，也可用于Western等結(jié)合有辣根過氧化物酶的膜的顯色檢測。同時也可以用于細胞或組織內(nèi)源性的辣根過氧化物酶顯色。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 洗滌液

2. 蒸餾水

操作步驟(僅供參考)：

1. 常規(guī)組織切片、細胞樣品、膜與辣根過氧化物酶標記的抗體或其它形式的探針孵育后，用適當洗滌液洗滌3～5次，每次3～5min。對于檢測內(nèi)源性辣根過氧化物酶的組織或細胞樣品，在適當固定后，也可用洗滌液洗滌3～5 次，每次3～5min。

2. 按(A):試劑(B):試劑(C)=5000:5000:3 的比例混合, 即為DAB染色工作液，即配即用。

3. 洗滌過組織后，去除洗滌液，加入適量DAB染色工作液，確保覆蓋樣品。

4. 室溫避光孵育30min或更長時間，直至顯色至預(yù)期深淺。

5. 去除DAB染色工作液，用蒸餾水清洗1～2次即可終止顯色反應(yīng)。

6. 對組織切片或細胞樣品，反應(yīng)終止后，如有必要可用中性紅染色液染色，便于觀察。對于膜染色，反終止后可室溫晾干避光保存。

注意事項：

1. DAB是致癌物，請注意適當防護。

2. 試劑(A)、試劑(B)避免反復(fù)凍融。

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

常見問題及可能原因：

1. 背景顯色太深

① 在免疫組化時如果背景顯色太深，考慮使用適當?shù)姆忾]液進行封閉，例如選購適當?shù)姆忾]液或使用和一抗相同來源的血清(10%)進行封閉。也應(yīng)請注意選購經(jīng)過適當吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。

② 在進行含內(nèi)源性過氧化氫酶的免疫組化時，如果背景顯色太深，需注意滅活內(nèi)源性過氧化氫酶?？梢栽?/span>4體積甲醇中加入1體積3%過氧化氫，混勻后用于內(nèi)源性過氧化氫酶的滅活。

③ 可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗?jié)舛取?

④ 選擇適當強度的洗滌液，或延長洗滌時間。

2. 沒有顯色或顯色太弱

①當提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在膜上，檢測二抗是否可以被正常顯色。

②考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用生物&素檢測體系。

③適當延長顯色時間，另外確定抗原修復(fù)是否對于使用的一抗是必需的。

有效期：12個月有效。