考馬斯亮藍染色液的說明書

考馬斯亮藍染色液

產(chǎn)品貨號：B2132S

產(chǎn)品包裝：100ml/500ml

產(chǎn)品簡介：

考馬斯亮藍染色液(Commassie Blue Staining Solution)是以考馬斯亮藍R250為染料可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳膠的常規(guī)染色或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測。采用常規(guī)染色方法需至少1h,采用快速染色方法一般數(shù)分鐘即可。本染色液經(jīng)過改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性氣味的乙酸。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 水平搖床或側(cè)擺搖床

2. 蒸餾水

3. 20%甘油水溶液

4. (可選)加熱裝置

操作步驟(僅供參考)：

(一)常規(guī)染色脫色方法

1. PAGE電泳結(jié)束后取凝膠放入適量考馬斯亮藍染色液中，確保染色液可以充分覆蓋凝膠。

2. 置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動，室溫染色 1 小時或更長時間。具體的染色時間取決于凝膠的厚度和染色時的溫度。凝膠較厚，溫度較低，則染色時間宜適當(dāng)延長。凝膠較薄，溫度較高，則染色時間可以適當(dāng)縮短。通常染色至凝膠的顏色和染色液的顏色非常接近，在染色液中幾乎看不清凝膠時，可以認為已染色充分。染色2～4個小時或更長時間不會對最終的染色效果產(chǎn)生負面影響。

3. 倒出染色液。染色液可以回收重復(fù)使用2～3次。

4. 加入適量脫色液，確保脫色液可以充分覆蓋凝膠。尚寶生物 推薦脫色液的配方是：40% 乙醇，10%乙酸，50％蒸餾水。

5. 置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動，室溫脫色4～24h。期間更換脫色液2～4次，直至藍色背景基本上全部被脫去，并且蛋白條帶染色效果達到預(yù)期。通常蛋白條帶在脫色1～2h后即可出現(xiàn)。

6. 完成脫色后把凝膠保存在水中，用于后續(xù)的拍照等。保存在水中的凝膠會發(fā)生溶漲。如需避免溶漲，可以把膠保存在含 20%甘油水溶液中，長期保存可以制備干膠。

(二)快速染色脫色方法

1. PAGE電泳結(jié)束后取膠放入適量考馬斯亮藍染色液中，微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰，立即停止加熱。通常對于膠濃度大于10％的膠比較堅韌，在發(fā)生煮沸時不易破損；對于膠濃度小于 10%的膠，宜盡量避免煮沸，以免出現(xiàn)膠碎裂的情況。

2. 隨后在染色液溫度較高的情況下，在室溫搖床上搖動5～10min。

3. 倒出染色液。染色液可以回收重復(fù)使用2～3次。

4. 加入適量脫色液，確保染色液可以充分覆蓋凝膠。尚寶生物 推薦脫色液的配方是：40%乙醇，10%乙酸，50％蒸餾水。

5. 微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰，立即停止加熱。

6. 隨后在脫色液溫度較高的情況下，在搖床上搖動5～10min。此時通?？梢杂^察到比較清楚的蛋白條帶。

7. 更換新鮮的脫色液，重復(fù)步驟5和步驟6，直至藍色背景基本上全部被脫去，蛋白條帶染色效果達到預(yù)期。

8. 完成脫色后，把凝膠保存在水中，用于后續(xù)的拍照等。保存在水中的凝膠會發(fā)生溶漲。如需避免溶漲，可以把膠保存在含 20%甘油水溶液中，長期保存可以制備干膠。

注意事項：

1. 染色時，如果把凝膠和染色液一起放置在微波爐中適當(dāng)加熱，可以大大加快染色速度。但加熱時宜盡量避免沸騰，以免出現(xiàn)因暴沸而導(dǎo)致的凝膠碎裂。

2. 脫色期間可以在脫色液中加入一片吸水紙，可以使部分染料吸附在吸水紙上，加快脫色。脫色時間過長也會導(dǎo)致蛋白條帶的顏色變淺。

3. 如果希望染色的背景更低，希望獲得更加清晰的蛋白條帶，可以加入適量的室溫蒸餾水進行洗滌。通過蒸餾水洗滌可以進一步降低背景。在4℃蒸餾水中浸泡過夜可以獲得背景更低，條帶更清晰的條帶。在次日對 4℃蒸餾水浸泡過夜的已經(jīng)進行了染色的凝膠再同前一天一樣進行染色和洗滌可以進一步改善染色效果，獲得更好的考染蛋白條帶。

4. 常規(guī)染色脫色方法耗時較長，但檢測靈敏度更高，染色效果更加穩(wěn)定。快速染色脫色方法通常檢測靈敏度略低，并且在微波爐加熱的過程中有時會出現(xiàn)暴沸導(dǎo)致凝膠碎裂的情況，需特別注意。另外微波爐加熱導(dǎo)致的高溫會引起染色液和脫色液中的乙酸的揮發(fā)，。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：
12個月有效。