植物核DNA大量提取試劑盒使用說明書

植物核DNA大量提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：BA1848

產(chǎn)品規(guī)格：20T

產(chǎn)品簡介：

從植物組織中制備基因組DNA較常采用的方法有氯化離心法、CTAB抽提法等。CTAB抽提法是經(jīng)典且迅速的植物DNA提取法，可以用于多種不同類型植物樣品中DNA的提取，獲得的量很高，但是純度一般，但是足夠用于大多數(shù)分子生物學(xué)實驗。

植物核DNA大量提取試劑盒是簡單快速簡便的提取植物核中DNA的試劑盒，先將新鮮植物樣本研磨破碎細胞壁，采用差速離心法分離出細胞核并將其破碎，再用CTAB抽提液提取出核DNA。本法制備量大，所提DNA可供進一步純化及基因轉(zhuǎn)化使用。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 液氮、研缽或勻漿器

2. 離心機、離心管

3. 冰箱、恒溫箱或水浴鍋

4. 二*醚、異丙醇

操作步驟(僅供參考):

(一)樣品處理及分離細胞核：

1. 稱取10g幼葉樣本或8g愈傷組織等，置燒杯中，于通風(fēng)櫥中加入預(yù)冷的二*醚，浸沒材料，搖晃1~2min，傾出二*醚，預(yù)冷的水沖洗樣本。

2. 用刀片去除葉脈，并分割成小塊，轉(zhuǎn)入勻漿器或研缽中，加入預(yù)冷的20ml的核分離緩沖液，中速勻漿1~3min。用4層無菌平紋細布和1層Miracloth過濾勻漿至離心管中。

3. 500r/min 4℃離心10min，去上清。沉淀用1~1.3ml核沖洗緩沖液懸浮，再用500r/min 4℃離心10min（重復(fù)2~3次），使細胞核與細胞碎片分離，收集細胞核樣品。細胞核可懸浮于核儲存緩沖液中，-70℃保存。

(二)細胞核破碎及DNA提?。?/span>

1. 配制核裂解液：按核裂解緩沖液：蛋白酶K溶液=1ml：0.025ml的比例混合即成。

2. 將上一步分離的核樣品懸浮于0.25ml核裂解液中，37℃保溫30min。再向其中加入5ul 2-ME 和90℃預(yù)熱的0.25ml CTAB抽提液，立即混勻。再加入0.5ml的蛋白沉淀劑，溫和地反復(fù)顛倒離心管。室溫下10000 r/min離心10min，上清轉(zhuǎn)入新的離心管。

3. 加入1/10體積的CTAB溶液(10%)[約0.05ml]。再次加入等體積[約0.5ml]的蛋白沉淀劑，溫和地顛倒混勻離心管，室溫下3500 r/min離心10min，上清轉(zhuǎn)入新的離心管。

4. 加入1/2～2/3體積預(yù)冷的DNA沉淀液，輕輕混勻，室溫靜置使核酸沉至管底。如果觀察不到沉淀，可在室溫下靜置數(shù)小時至過夜。

5. 2000g離心2min，輕輕棄上清液。松散的DNA沉淀物置于小離心管中加入0.5~1ml DNA洗滌液，室溫靜置10min，4000r/min離心10min，收集沉淀，重復(fù)操作兩次，清除CTAB。

6. 自然干燥DNA，加入20～50μl TE buffer- RNase A混合液（1ml+1ul），37℃保溫1h。加入乙酸銨溶液(7.5M)使終濃度為2.5M，并加入2倍體積的預(yù)冷無水乙醇，溫和混勻，室溫放置10min。

7. 室溫15000r/min離心10min，收集沉淀，吹干保存，使用時溶于適量TE buffer，-20℃保存。注意：TE buffer體積越大，DNA濃度越低。

注意事項:

1. 如果每次的使用量很小，可以適當(dāng)分裝后再使用。

2. 用于裂解植物組織或葉片越新鮮，裂解越好、收獲量越大。

3. 二*醚處理材料可促進角質(zhì)層溶解及細胞破裂。

4. 提取過程中的機械力可使大分子DNA斷裂，因此各步操作均應(yīng)溫和，避免劇烈震蕩。

5. 使用到的器皿、離心管最好經(jīng)過硅化處理。

6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：6個月有效。