Tris-氯化銨紅細胞裂解液（無菌）使用說明書

Tris-氯化銨紅細胞裂解液（無菌）

產(chǎn)品貨號：R22027

產(chǎn)品規(guī)格：100ml/500ml

產(chǎn)品簡介：

在生物科研領(lǐng)域，經(jīng)常需要去除紅細胞，去除紅細胞的方法有多種，如ACK Lysis Buffer、Tris-氯化銨紅細胞裂解液、Gey's Lysis Buffer。Tris-氯化銨紅細胞裂解液(TrisNH4Cl Red Blood Cell Lysis Buffer)，也稱為Tris-NH4Cl Lysis Buffer，是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細胞的溶液，其主要有效成分為NH4Cl。

尚寶生物 Tris-氯化銨紅細胞裂解液（無菌）經(jīng)過優(yōu)化配方，在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞(Lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。本裂解液經(jīng)過濾除菌，經(jīng)過Tris-NH4Cl Lysis Buffer處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續(xù)的細胞培養(yǎng)、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 胰蛋白酶

2. 離心機

3. PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液

4. 胎牛血清

操作步驟(僅供參考)：

(一)組織細胞樣本的常規(guī)操作

1. 制備細胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當(dāng)方法制備成細胞懸液，離心棄上清。

2. 裂解: 加入3～5倍細胞沉淀體積的Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～2min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3. 離心: 4℃，400～500g離心5min，棄紅色上清。如無低溫離心機，本步驟亦可在室溫下操作。

4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不wan全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。

5. 洗滌：根據(jù)實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g 離心2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細胞沉淀體積的5倍以上。

6. 如有必要，重復(fù)上述步驟5一次，共洗滌1～2次。

7. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

(二)組織細胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1. 制備細胞懸液：新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當(dāng)方法制備成細胞懸液，離心棄上清。

2. 裂解：加入細胞5倍細胞沉淀體積的Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～2min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3. 加入15～20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

4. 離心：4℃，400～500g離心5min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。

5. 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不wan全，可以重復(fù)上述步驟2～4各一次。

6. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

(三)血液樣本的常規(guī)操作

1. 取新鮮抗凝血，400～500g離心5min，棄上清。

2. 裂解: 加入6～10倍細胞沉淀體積的Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～5min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。(特別提醒：對于鼠的血液，裂解1～2min 已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至4～5min，并且裂解過程中輕輕搖動以促進紅細胞裂解。)

3. 離心: 4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清。如無低溫離心機，本步驟亦可在室溫下操作。

4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不wan全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。

5. 洗滌: 根據(jù)實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g 離心2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細胞沉淀體積的5倍以上。

6. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

注意：對于微量或少量的血液樣本，可以不用第1步操作，可直接加入10倍血液體積的Tris-NH4Cl Lysis Buffer 進行第2步操作，并在4℃或室溫裂解4～15min。對于鼠的血液，裂解4～5min已經(jīng)足夠； 對于人的外周血，宜延長裂解時間至10min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動以促進紅細胞裂解。

(四)血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1. 新鮮抗凝血中加入10倍體積的Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，裂解4～15min。

本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對于鼠的血液，裂解4～5min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動以促進紅細胞裂解。）

2. 加入20～30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

3. 400～500g離心5min，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不wan全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。

5. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

注意事項：

1. 制備細胞懸液時應(yīng)根據(jù)實驗需要，不一定要制備成單細胞懸液。

2. 后續(xù)試驗如果是用于細胞培養(yǎng)，操作過程中應(yīng)注意無菌操作，盡量在超凈工作臺內(nèi)操作。

3. 離心步驟盡量在4℃離心機上操作。

4. 常規(guī)步驟不快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心，可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。

5. 離心洗滌后，通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的檢測。

6. 如果經(jīng)過ACK Lysis Buffer處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取，在處理細胞時不必使用DEPC處理的溶液，即無需在該操作中特意去除RNase。

7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：

12個月有效。