吖啶橙熒光染色試劑盒 返回列表頁

產(chǎn)品貨號(hào)：R21805

產(chǎn)品規(guī)格：100T

產(chǎn)品簡介：

吖啶橙熒光染色試劑盒( Acridine Orange,AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料,可以標(biāo)記 DNA、RNA,屬于異染性熒光染料。該染料具有膜 通透性,能透過細(xì)胞膜,使核 DNA 和 RNA 染色。因此 AO 常用于細(xì)胞內(nèi) DNA 和 RNA 進(jìn)行檢測。AO 與核酸結(jié)合方式主要 有:1、插入性結(jié)合,AO 嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間種結(jié)合方式主要為 AO 與 DNA 的結(jié)合,其熒光發(fā)射峰為 530nm,激發(fā) 后呈綠色熒光;2、靜電吸引,帶正電荷的 AO 與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合,這種結(jié)合方式 主要為 AO 與 RNA 的結(jié)合,其熒光發(fā)射峰為 640nm,激發(fā)后呈紅色熒光,少量結(jié)合會(huì)呈桔黃色或桔紅色熒光。因此,吖 啶橙嵌合到雙鏈 DNA 分子中顯綠色,與 DNA 單鏈或 RNA 結(jié)合時(shí)發(fā)桔黃色或橙紅色熒光吖啶橙染色試劑盒( Acridine Orange Detection Kit)主要由 Ao Stain、AO Stain Buffer 組成,常用于細(xì)胞凋亡的檢測。染色后在熒光顯微鏡 下觀察,吖啶橙可透過正常細(xì)胞膜,使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細(xì)胞中,因染色質(zhì)固縮或斷裂為大 小不等的片斷,形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒;而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚 至消失。吖啶橙染色常與 EB 染色合用雙染,EB 只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光,由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞 及壞死細(xì)胞。

試劑包裝：

自備材料：

1.熒光顯微鏡

2.低速離心機(jī)

3.PBS

4.細(xì)胞計(jì)數(shù)板、

5.載玻片、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：

（一）AO 單獨(dú)染色

1.收集細(xì)胞(采用流式細(xì)胞儀檢測時(shí),應(yīng)先固定細(xì)胞),用 AO Stain Buffer(1×)清洗細(xì)胞 1 次,加入適量的 AO Stain Buffer(1×)重懸細(xì)胞,計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至 10 6/ml。

2.取適量的細(xì)胞懸液和 Ao Stain,按照細(xì)胞懸液: Ao Stain=19:1 的比例混合,輕輕混勻。如果采用熒光顯微鏡下 觀察,一般取 95μl 細(xì)胞懸液和 5μl AO Stain 混合即可。

3.室溫避光染色 15min,滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細(xì)胞儀分析。

4.熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長 488nm,阻斷濾光片波長 515nm),計(jì)數(shù)并拍照。

染色結(jié)果：

正常細(xì)胞    細(xì)胞被均勻染成黃綠色熒光

凋亡細(xì)胞    染色質(zhì)濃縮,細(xì)胞核碎裂成點(diǎn)狀,被染成大小與一、致密濃染的綠色顆粒

（二）AO/EB 雙染色

1.收集細(xì)胞,用 Ao Stain Buffer(1×)清洗細(xì)胞 1 次,加入適量的 Ao Stain Buffer(1×)重懸細(xì)胞,計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì) 胞濃度至 10 6/ml。

2.取適量的細(xì)胞懸液和 Ao Stain,按照細(xì)胞懸液 Ao Stain=19:1 的比例混合,并加人適量 EB 染色液,輕輕混勻。如 果采用熒光顯微鏡下觀察,一般取 95μl 細(xì)胞懸液和 5μl Ao Stain 混合即可。

3.室溫避光染色 15min,滴加于載玻片上并加蓋玻片。

4.熒光顯微鏡濾光片 515nm 觀察,計(jì)數(shù)并拍照。

染色結(jié)果：

正常細(xì)胞    均勻染成綠色熒光

壞死細(xì)胞    細(xì)胞桔黃色熒光

調(diào)亡細(xì)胞    染色質(zhì)濃縮,細(xì)胞核碎裂,被染成大小不一、致密濃染的黃綠色 顆?；蛞姲|(zhì)芽狀突起

注意事項(xiàng)：

1.吖啶橙染色常與 EB 染色合用，可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

2.如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳，同事應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。

3.為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：6 個(gè)月有效。