NP-40 裂解液 蛋白類 返回列表頁

NP-40裂解液 蛋白類

產(chǎn)品貨號：T16007

產(chǎn)品包裝：100ml

產(chǎn)品簡介：

NP-40 裂解液  蛋白類多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白，如Triton、SDS、NP-40等。NP-40裂解液 (NP-40 Lysis Buffer)是采用一種溫和的裂解方法獲得總蛋白的裂解液。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于PAGE電泳、Western、免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP) 等，并含有多種蛋白酶抑制劑成分，可有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。

尚寶生物NP-40 Lysis Buffer主要由Tris-HCl、NaCl、NP-40以及sodium pyropho -sphate，β-glycerophosphate，sodium fluoride, EDTA 等多種蛋白酶抑制劑組成。用NP-40 Lysis Buffer得到的蛋白，可以用BCA蛋白定量試劑盒和 Bradford 蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。

產(chǎn)品組成：

NP-40 裂解液  蛋白類操作步驟（僅供參考）：

(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

• 取NP-40 Lysis Buffer置于室溫溶解混勻，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。
• 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液，用PBS、NS或無血清培養(yǎng)液清洗1次，低速離心，棄上清，留取沉淀。
• 按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入NP-40 Lysis Buffer 。移液器輕輕吹打，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解15～30min，通常裂解液作用于細(xì)胞1～3s內(nèi)，細(xì)胞就會被裂解。
• 10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。
• 進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞

• 取NP-40 Lysis Buffer置于室溫溶解混勻，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。低速離心懸浮細(xì)胞，棄上清，收集沉淀。
• 用手指輕彈細(xì)胞，使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150～200μl含有PMSF的裂解液的比例，加入NP-40 Lysis Buffer。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。
• 10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。
• 進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)組織樣本

• 取NP-40 Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。把組織剪切成細(xì)小的碎片，越小越好。
• 取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
• 按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解30～60min。
• 步驟3、4 亦可以采用如下過程：按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例，加入含有PMSF的NP-40 Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿，直至充分裂解，該過程盡量控制在1～2min 之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
• 10000～12000g，4℃離心5～15min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。
• 進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

NP-40 裂解液  蛋白類注意事項(xiàng)：

• 在貼壁培養(yǎng)細(xì)胞的操作步驟中，去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后，如果血清中的蛋白沒有干擾， 可以不用清洗。
• 如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。
• 在培養(yǎng)細(xì)胞的裂解中，如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50～100萬細(xì)胞/離心管，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。
• 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
• 溶解NP-40 Lysis Buffer 時(shí)，應(yīng)盡量縮短溶解時(shí)間，避免裂解液中的有效成分失效。
• 細(xì)胞裂解的操作步驟，應(yīng)置于冰上或 4℃進(jìn)行。
• 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：

12個(gè)月有效。