高純度質粒小提試劑盒 返回列表頁

高純度質粒小提試劑盒

產品貨號：26210

產品規(guī)格：50次/100次/200次

產品簡介：

高純度質粒小提試劑盒適合提取1-5 ml菌液，在堿裂解法裂解細胞的基礎上，采用*的硅基質膜吸附技術和試劑配方，通過離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下高效專一的結合溶液中的質粒DNA，每個吸附柱最高可吸附30 μg的質粒DNA，并最大限度的去除蛋白質、基因組、RNA和其他雜質。得到的質粒DNA可直接用于細胞轉染、PCR、酶切、測序、連接等生物學實驗。

包裝清單：

自備試劑：使用前Buffer PE 50次加入36ml無水乙醇/100次加入72ml無水乙醇/200次加入144ml無水乙醇

操作步驟：

1. 取-5 ml過夜培養(yǎng)的菌液加入離心管（自備）中，12000 rpm離心30秒收集菌體沉淀，盡量吸棄上清。

2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入250μl Buffer P1，使用移液器或渦旋振蕩器充分混勻，懸浮菌體沉淀。

注意：如果菌塊未*混勻，將會影響裂解效果，導致提取量和純度偏低。

3. 向離心管中加入250μl Buffer P2，溫和地上下顛倒混勻4-6次，充分混勻使菌體裂解，此時溶液應變得清亮粘稠。

注意：溫和混勻，不要劇烈震蕩，以免打斷基因組DNA，造成提取的質粒中混有基因組DNA片段。

4. 此步驟所用時間應不超過5分鐘，避免質粒受到破壞。

5. 向離心管中加入350μl Buffer N3，立即溫和地上下顛倒混勻8-10次，充分混勻，此時應出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12000 rpm離心5分鐘。

注意：Buffer N3加入后應立即混勻，避免產生局部沉淀。

6. 將步驟4中所得的上清液轉移到已裝入收集管的吸附柱（Spin Columns）中，12000 rpm離心30秒鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

7. 向吸附柱中加入500μl Buffer PB，12000 rpm離心30秒。

8. 向吸附柱中加入750μl Buffer PE（請先檢查是否已加入無水乙醇），12000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。

9. 將吸附柱置于一個新的離心管（自備）中，向吸附膜的中間部位加入50μl BufferEB，室溫放置1分鐘，12000 rpm離心1分鐘，將質粒溶液收集到離心管中。-20℃保存質粒。

注意：

1. 為了增加質粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置2分鐘，12000 rpm離心1分鐘，將質粒溶液收集到離心管中。

2. 質粒拷貝數(shù)較低或>10 kb時， Buffer EB在65~70℃水浴預熱，可以增加提取效率。

注意事項：

1. 前若發(fā)現(xiàn)Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復澄清（請勿劇烈晃動Buffer P2）。

2. 第一次使用前應按照說明在Buffer PE中加入144ml無水乙醇。

3. 注意不要直接接觸Buffer P2 、Buffer N3和 Buffer PB，使用后應立即蓋緊蓋子。

4. 提取質粒的量和純度與細菌培養(yǎng)濃度、菌株種類、質粒大小、質?？截悢?shù)等因素有關。