哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒 返回列表頁

哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒 

產(chǎn)品貨號：11065

 產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

 產(chǎn)品簡介：

 用分子生物學(xué)技術(shù)研究復(fù)雜的基因組，首先要求制備純凈的高分子質(zhì)量DNA，一般分為兩個步驟，先裂解細(xì)胞、溶解DNA，接著采用酶學(xué)或化學(xué)方法去除蛋白、RNA以及其他大分子。

尚寶生物 哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)采用經(jīng)典的蛋白酶K處理法，可以抽提到100～150kb以上的基因組DNA，提取的基因組DNA可用于Southern雜交、基因組DNA的PCR擴(kuò)增及基因組DNA文庫的構(gòu)建等。該試劑盒的提取效率大致為，從1g組織可以提取到約150～200μg 100kb以上的基因組DNA，從10 ～10 Hela細(xì)胞可以提取到約5～50μg 100kb以上的基因組DNA。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

 產(chǎn)品組成：

 試劑盒內(nèi)容 50T 100T 保存條件試劑(A): 樣品裂解液 50ml 100ml 4℃試劑(B): 蛋白酶K溶液 150μl 300μl -20℃，避光試劑(C): 乙酸銨溶液 10ml 20ml 室溫試劑(D): Nuclease Free Water 10ml 20ml 室溫自備材料：1. 組織或培養(yǎng)細(xì)胞2. PBS3. 無水乙醇、70%乙醇4. 25:24:1 酚/氯仿/異戊醇 

操作步驟 (僅供參考) ：

 1. 準(zhǔn)備樣品：①組織樣本：切下組織并立即剪成小塊，置于液氮中凍結(jié)。將 100mg～1g 凍結(jié)的組織用預(yù)冷的研缽和研杵研碎或用錘子將其搗成碎末。培養(yǎng)細(xì)胞：收集貼壁生長或懸浮生長細(xì)胞培養(yǎng)液，貼壁生長細(xì)胞需先用胰蛋白酶消化液消化，再用 PBS 清洗一次。4℃離心機(jī)，1000～2000g 離心 1～2min，棄上清。用 1～10ml 預(yù)冷的 PBS 再次懸浮離心，如此 2 次洗滌。

 2. 每 1ml 樣品裂解液加入 5μl 的蛋白酶 K 溶液，混勻。每 50mg 組織或 5×107 細(xì)胞用 0.5～0.6ml 樣品裂解液懸浮，懸浮應(yīng)*，不應(yīng)留下結(jié)塊。 

3. 充分混勻，50℃振蕩下溫育 12～18h 或過夜。

 4. 加入等體積 25:24:1 酚/氯仿/異戊醇，輕輕混合，盡可能減少對 DNA 的剪切。

 5. 吸出酚相及中間相(可以吸除少量靠近中間相的水相液體)，剩余的水相用等體積酚/氯仿/異戊醇再抽提一次。重復(fù)該步驟 1 次。 

6. 吸取上層液(水溶液)250～300μl 至新 EP 管中，加入等體積無水乙醇和 1/4 體積的乙酸銨溶液，顛倒混勻數(shù)次。

 7. 4℃ 10000g 1min，棄上清。

 8. 加入 70%乙醇，4℃ 10000g 1min，棄上清。重復(fù)該步驟一次。

 9. 盡量吸除殘余的乙醇，空氣干燥，等到不到明顯液體時，立即加入 50～100μl Nuclease Free Water 溶解 DNA，4℃或-20℃保存。注意：不可過分干燥基因組 DNA 沉淀，否則會極難溶解。如果發(fā)現(xiàn) DNA 沉淀難以溶解，可以在 4℃用搖床緩慢搖動過夜，以溶解 DNA 沉淀。

 10. A 260 /A 280 處檢測 DNA 純度，高純度的 DNA 一般 A 260 /A 280＞1.8。

 注意事項：

 1. 如果打算提取大片段的基因組 DNA，應(yīng)盡量避免基因組 DNA 的物理性剪切。例如避免劇烈振蕩含有基因組DNA 的樣品，可以用剪掉槍頭尖的槍頭吸取基因組 DNA 的樣品。

 2. 準(zhǔn)備細(xì)胞樣品時，如果細(xì)胞量過少(＜3×107 )，應(yīng) 0.3ml 含蛋白酶 K 的樣品裂解液。

 3. 為避免高分子質(zhì)量 DNA 被剪切，可以不采用乙醇沉淀 DNA，可用透析袋替代乙醇：在 100 倍體積的 TE buffer中至少透析 2 次，所用取全部時間應(yīng)＞24h。

 4. 不可過分干燥基因組 DNA 沉淀，否則會極難溶解。5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 有效期：6 個月有效。