酵母基因組DNA提取試劑盒 返回列表頁

酵母基因組DNA提取試劑盒產(chǎn)品貨號：26230產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T產(chǎn)品簡介：本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，提取酵母基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料，能夠高效專一吸附DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實驗。產(chǎn)品組成：試劑盒內(nèi)容 50T 100T 保存條件RNaseA 1ml 1ml×2 -20℃蛋白酶K 1ml 1ml×2 -20℃酵母破壁酶 1.25ml 1.25ml×2 -20℃巰基還原劑 300μL 600μL -20℃山梨醇Buffer 25ml 50ml 室溫溶液A 10ml 20ml 室溫溶液B 10ml 20ml 室溫漂洗液 15ml 30ml 室溫洗脫液 15ml 30ml 室溫吸附柱 50個 100個 室溫收集管 50個 100個 室溫操作步驟 (僅供參考) ：使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。1. 取酵母細胞不超過5×107 cell s)，12000rpm離心1min，盡量吸除上清。2. 酵母細胞壁的破除：向酵母菌體中加入470ul山梨醇Buffer。充分懸浮菌體，加入25ul酵母破壁酶和5ul巰基還原劑，充分混勻。30℃處理 2h，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。3. 12000rpm離心lmin，棄上清，收集沉淀。4. 向沉淀中加入200ul溶液 ，充分懸浮沉淀，向懸浮液中加入20ul的RNase A(10mg/ml)，充分顛倒混勻，室溫放置 10min。5. 加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml)，充分顛倒混勻。65℃水浴消化15-30min，消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直至樣品消化*為止。6. 加入200ul溶液，再加入200ul無水乙醇，充分顛倒混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響DNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，室溫放置2min。7. 12000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液（使用前請先檢查是否己加入無水乙醇）。12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。9. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm離心1min， 棄廢液，將吸附柱放入收集管中。10. 12000rpm離心2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)實驗如酶切、PCR等。11. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min， 12000rpm離心1min。12. 離心所得洗脫液再加入吸附柱中，12000rpm離心2min，即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。注意事項：1. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。2. 若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。3. 如果實驗中的離心步驟出現(xiàn)柱子堵塞的情況，可適當延長離心時間。4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul，體積過小會影響回收效率；洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍，pH 值低于 7. 0 會降低洗脫效率。 DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。5. DNA 濃度及純度檢測：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)?；厥盏玫降?DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA 應(yīng)在 OD260處有顯著吸收峰，OD260值為 1.0 相當于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/0D280比值應(yīng)為 1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。有效期：室溫干燥保存，復(fù)檢期 12 個月，2~8℃保存時間更長。