全血基因組DNA提取系統(tǒng)（沉淀法） 返回列表頁(yè)

全血基因組DNA提取系統(tǒng)（沉淀法）產(chǎn)品貨號(hào)：26237產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T產(chǎn)品簡(jiǎn)介：產(chǎn)品適用于處理新鮮的或已經(jīng)添加抗凝劑的血液樣品，采用異丙醇沉淀方法，操作簡(jiǎn)便，尤其適合大量提取血液基因組DNA。提取的DNA可用于PCR、酶切等常規(guī)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。本產(chǎn)品使用前請(qǐng)根據(jù)使用量將10×紅細(xì)胞裂解液用水稀釋成1×的即用型紅細(xì)胞裂解液。處理血液量 1ml 5ml 10ml紅細(xì)胞裂解液(1×) 5ml 25ml 50ml白細(xì)胞裂解液 0.5ml 2.5ml 5ml蛋白沉淀液 0.5ml 2.5ml 5ml異丙醇 1ml 5ml 10ml75%乙醇 1ml 5ml 10mlDNA溶解液 100μl 0.5ml 1ml產(chǎn)品組成：試劑名稱 50T 100T10×紅細(xì)胞裂解液 30ml 60ml白細(xì)胞裂解液 30ml 60ml蛋白沉淀液 30ml 60mlDNA 溶解液 15ml 30ml操作步驟：以 1ml 全血為例1. 樣品的處理：在血液中加入 3 倍體積的 1×紅細(xì)胞裂解液(請(qǐng)確認(rèn)已經(jīng)稀釋過(guò))，充分顛倒混勻，12000rpm 離心 1min(如為大量提取并且為大離心機(jī)，可 11000 轉(zhuǎn)離心 5min)，小心吸去上清，再加入 2 倍體積的 1×紅細(xì)胞裂解液，用移液器輕輕吹打沉淀，充分混勻，離心，棄上清，沉淀為白細(xì)胞。2. 向沉淀中加 500ul 白細(xì)胞裂解液，振蕩或者用移液器吹打至*混勻。65℃水浴 10-20min，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直至溶液較為清澈看不見明顯細(xì)胞為止。3. 加入 500ul 蛋白沉淀液，充分顛倒混勻，此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色沉淀，65℃水浴 5min，12000rpm 離心 5min，小心吸取 上清(不要吸到下層沉淀或漂浮不溶物)，轉(zhuǎn)移到干凈離心管中，如還有沉淀物，可再次離心。4. 在上清中加入 1ml 異丙醇，混勻。12000rpm 離心 5min，可看到管底有少量白色 DNA 沉淀，棄掉上清。5. 向離心管中加入 1ml 75%乙醇，12000rpm 離心 5min，棄去上清液?？稍俅味虝弘x心用移液器去除殘余上清。6. 將離心管敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，否則乙醇可能影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。7. 向離心管中加入 100-300ul DNA 溶解液，室溫放置讓 DNA 自然溶解。如果 DNA 難于溶解，可室溫放置過(guò)夜或?qū)?離心管置于 50-60℃水浴中水浴加熱 5min。注意事項(xiàng)：1. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。2. 若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。3. DNA 濃度及純度檢測(cè)：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)?；厥盏玫?DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。DNA 應(yīng)在 OD260處有顯著吸收峰，OD260 值為 1 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/OD280 比值應(yīng)為 1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)?pH 值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。保存條件：室溫(15-25℃) 干燥保存，復(fù)檢期 12 個(gè)月，2-8℃保存時(shí)間更長(zhǎng)。全血基因組DNA提取系統(tǒng)（沉淀法）