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Lezol（總RNA提取試劑盒）  核酸類

產(chǎn)品貨號(hào)：T11163

產(chǎn)品規(guī)格：50ml/100ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Lezol(總RNA提取試劑) 核酸類 Lezol是一種尚寶生物自主研發(fā)和生產(chǎn)的用于細(xì)胞或組織的總RNA提取試劑。Lezol采用不Invitrogen TRIzol相似的原理和方法，Lezol顏色、抽提的方法和步驟亦不Invitrogen TRIzol*相同。Lezol含酚和異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速裂解細(xì)胞或組織并且滅活核酸酶，保持RNA的完整性。加入氯仿并離心后，溶液形成上清層為水相(無(wú)色)、中間層、下層為有機(jī)相(紅色)。上清層用異丙醇沉淀回收總RNA，中間層用乙醇沉淀回收DNA，下層用異丙醇沉淀回收蛋白。尚寶生物 Lezol適用于從各種組織或細(xì)胞中快速分離總RNA，既可用于小量樣品(50～100mg組織、5×10細(xì)胞)，也可用于大量樣品(>1g組織/>10細(xì)胞)。提取的總RNA質(zhì)量高，可用于Northern blot、Dot blot、polyA篩選、體外翻譯、RNase保護(hù)分析和分子克隆。Lezol具有以下特點(diǎn)：①適用范圍廣；②操作簡(jiǎn)單，整個(gè)過(guò)程1小時(shí)內(nèi)完成；③純度高；④污染少。

產(chǎn)品組成：

自備材料：    

1. 試劑：無(wú)水乙醇、氯仿、異丙醇、DEPC處理水等。 

2. 耗材： RNase廣泛存在于人的皮膚上和體液及環(huán)境中，RNase是導(dǎo)致RNA降解的最主要物質(zhì)，非常穩(wěn)定。操作時(shí)應(yīng)佩戴一次性口罩、手套、帽子。塑料制品、玻璃和金屬物品、實(shí)驗(yàn)儀器等應(yīng)清除RNase，移液器吸頭、EP管等制品的RNase free處理尤為重要。 

3. 儀器：低溫高速離心機(jī)、低溫冰箱。

操作步驟（僅供參考）：    

1. 樣品準(zhǔn)備

 (1) 貼壁細(xì)胞：

 1 接裂解：直接在培養(yǎng)瓶/皿中加入Lezol裂解細(xì)胞，每10cm面積加1ml Lezol，用移液器吹打混勻。

 2 胰蛋白酶消化：用無(wú)菌PBS洗滌細(xì)胞后，加入含有0.05～0.25%胰蛋白酶的PBS處理細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞脫離容器壁后，加入含有血清的培養(yǎng)基終止反應(yīng)，將細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)移至無(wú)RNase的離心管中，5000～6000g離心5min，收集細(xì)胞沉淀，去除上清。收集細(xì)胞時(shí)一定要將細(xì)胞培養(yǎng)液去除干凈，否則裂解不*，降低RNA收獲率。血液：取0.5～1 ml新鮮或凍存的血液，12000g離心5min，去除血漿，加入1ml Lezol，充分振蕩混勻。 

2. 核酸分離：充分振蕩混勻(可以置于低溫/超低溫冰箱凍存5～10min后，充分振蕩，反復(fù)1～3次)，將裂解樣品或勻漿液室溫放置5～10min，使核蛋白不核酸*分離。 

3. 樣品分層：加入0.2ml氯仿/1ml Lezol，劇烈振蕩15s，室溫放置2～3min。置于4℃離心機(jī)，12000g離心10～15min。上層為水相，中間層和下層為有機(jī)相，RNA在上層水相。 

4. 沉淀RNA：吸取上層水相(約500μl)轉(zhuǎn)移至無(wú)RNase的離心管中(不要吸取任何中間層物質(zhì),否則會(huì)有染色體DNA污染)，加入等體積異丙醇混勻(或者加入1.2倍體積尚寶生物Trizol與用RNA沉淀液，超低溫冰箱放置2～3hr,可以大大提高RNA回收率），室溫放置15～20min。12000g 4℃離心10min，離心后管側(cè)或管底形成膠狀沉淀，棄上清。

 5. 洗滌RNA：加入1ml DEPC水配制的75%乙醇/1ml Lezol洗滌沉淀(或者加入1ml尚寶生物Trizol與用RNA洗滌液，可以大大提高RNA純度），室溫放置5～10min，7500g 4℃離心5min，棄上清。室溫干燥5～10min，不宜過(guò)分干燥，否則RNA難以溶解。

 6. 溶解RNA：加入30～50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA，-70℃長(zhǎng)期保存或直接用于后續(xù)試驗(yàn)。對(duì)于肝、胰腺、腎等組織中RNase含量高的樣品，沉淀時(shí)用100%去離子甲酰胺溶解。

分析與定量：

1. 測(cè)定樣品在260nm和280nm的吸收值確定RNA的質(zhì)量。按1OD=40pg RNA計(jì)算RNA的產(chǎn)率。OD260/280在1.8～2.0視為抽提RNA純度較好。濃度在4μg/ml以上的樣品適于用分光光度計(jì)測(cè)定。

 2. 進(jìn)行甲醛變性瓊脂糖電泳，確定RNA的完整性和污染情況。

 3. 核酸分析儀測(cè)定RNA的質(zhì)量和純度。

注意事項(xiàng)：

1. 樣品保存：加入 Lezol 混勻后，樣品可在-70℃放置 1～2 月；RNA 樣品可以在 70%酒精中-70℃保存 2～4 周：如果需要長(zhǎng)期保存，應(yīng)置于超低溫冰箱中保存。

 2. Lezol 是強(qiáng)腐蝕性物質(zhì)，污染皮膚或眼睛后，立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時(shí)尋求醫(yī)生的幫助。

 3. Lezol 可常溫運(yùn)輸，建議保存 4℃保存。

 4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：

12個(gè)月有效。

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尚寶主營(yíng)產(chǎn)品：

試劑盒

· 細(xì)胞活力/毒性檢測(cè)試劑盒

· 蛋白提取相關(guān)試劑盒

· 蛋白定量/濃度測(cè)定試劑盒

· 核酸純化/提取相關(guān)試劑盒

· 核酸檢測(cè)試劑盒

· 染色試劑盒

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染色類

染色液     固定液    脫鈣液     染色輔助試劑     指示劑    

熒光染料

通用Buffer      常規(guī)溶液  

核酸類       蛋白與免疫  

生化試劑    病理常用染色試劑  

細(xì)胞類      細(xì)胞培養(yǎng)基

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DNA Marker   耗材

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