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斐林試劑（GB/T 5009.7-2016）

產(chǎn)品貨號(hào)：T16679

產(chǎn)品規(guī)格：2×100ml/2×500ml

產(chǎn)品簡介：

斐林試劑(Fehling's Reagent)又稱菲林試劑或裴林試劑，是德國化學(xué)家Hermann von Fehling 1849年所發(fā)明。斐林試劑與班氏試劑(Benedict's Reagent)相似，均是用來檢測還原糖的存在。其原理是與可溶性的還原性糖(葡萄糖、果糖和麥芽糖)在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。

尚寶生物 斐林試劑(GB/T 5009.7-2016)是根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)(食品中還原糖的測定)推薦的直接滴定的方法，主要由酒石酸鈉鉀、硫酸銅、亞甲藍(lán)、等組成。本產(chǎn)品的成分、原理和用途與斐林試劑(Fehling's Reagent)稍有區(qū)別。

斐林試劑(GB/T 5009.7-2016)主要用于含淀粉食品、酒料、碳酸飲料、肉制品、蜜餞等食品中還原糖的定量檢測；總糖的含量也可以測定，但需要提前水解后才能檢測，也可用于還原糖的定性試驗(yàn)。該方法的檢測原理是試樣經(jīng)去蛋白處理后，以亞甲藍(lán)為指示劑，在加熱條件下滴定標(biāo)定過的斐林試劑（A液與B液等量混合生成的可溶性藍(lán)色的酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物，也稱作堿性酒石酸銅溶液），樣品中的還原糖將酒石酸鉀鈉銅中的二價(jià)銅還原成紅色的氧化亞銅沉淀，氧化亞銅沉淀又與反應(yīng)生成可溶性的無色絡(luò)合物，當(dāng)二價(jià)銅全部被還原，稍過量的還原糖把亞甲藍(lán)還原，溶液就由藍(lán)色變?yōu)闊o色，即為滴定終點(diǎn)，根據(jù)樣品液的消耗體積計(jì)算還原糖含量。本產(chǎn)品未經(jīng)標(biāo)定，需客戶自行標(biāo)定。斐林試劑僅用于科研用途，不宜用于臨床檢測。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 試管、錐形瓶、容量瓶、玻璃珠

2. 水浴鍋、酒精燈等加熱裝置

3. 葡萄糖、果糖、轉(zhuǎn)化糖等還原糖標(biāo)準(zhǔn)（1mg/ml）

4. 50%鹽酸水溶液、氫氧化鈉溶液

5. 乙酸鋅溶液、溶液

6. 分析天平、酸式滴定管

操作說明：

1. Fehling's Reagent的標(biāo)定：

25ml的酸式滴定管中加入還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(1mg/ml)約15ml。向150ml錐形瓶中，依次加入Fehling's Reagent A 液和B液各5ml，再向其中加入10ml水和2~4粒玻璃珠。加熱錐形瓶，控制時(shí)間在2min內(nèi)沸騰，保持沸騰以每2秒1 滴的速度滴加還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直到溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，平行操作3次，取

平均值。計(jì)算每10ml Fehling's Reagent（A、B液各5ml）相當(dāng)于還原糖的質(zhì)量(mg)。

2. 試樣準(zhǔn)備：

a 含淀粉食品：稱取粉碎或混勻后的試樣10~20g（精確到0.001g），置250ml容量瓶中，加水200ml，45℃水浴中加熱1h，并時(shí)時(shí)振搖，冷卻后加水至刻度，混勻，靜置，沉淀。吸取200.00ml上清液置于另一250ml容量瓶中，緩慢加入乙酸鋅溶液和溶液各5ml，加水至刻度，混勻靜置30min，用干燥濾紙過去，棄去初濾液，后續(xù)濾液備用。

b 酒料：稱取混勻后的試樣100g（精確到0.01g），置于蒸發(fā)皿上，用氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發(fā)至原體積的1/4后，移入250容量瓶中，緩慢加入乙酸鋅溶液和溶液各5ml，加水至刻度，混勻靜置30min，用干燥濾紙過去，棄去初濾液，后續(xù)濾液備用。

c 碳酸飲料：稱取混勻后的試樣100g（精確到0.01g），置于蒸發(fā)皿上，在水浴上微微攪拌除去二氧化碳后，移入250容量瓶中，用水洗滌蒸發(fā)皿，并入容量瓶，加水至刻度，混勻后備用。

d 其他食品： 稱取粉碎后的固體試樣2.5~5g（精確到0.001g）或混勻后的液體試樣5~25g（精確到0.001g），置250ml容量瓶中，加水50ml，緩慢加入乙酸鋅溶液和溶液各5ml，加水至刻度，混勻靜置30min，用干燥濾紙過去，棄去初濾液，后續(xù)濾液備用。

3. 試樣溶液預(yù)測：

25ml的酸式滴定管中加入試樣溶液約15ml。向150ml錐形瓶中，依次加入Fehling's Reagent A液和B液各5ml，再向其中加入10ml水和2~4粒玻璃珠。加熱錐形瓶，控制時(shí)間在2min內(nèi)沸騰，保持沸騰以先快后慢的速度滴加試樣溶液，待溶液顏色變淺時(shí)，以每2秒1滴的速度滴加，直到溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄消耗試樣溶液的總體積。

(注：試樣溶液中還原糖濃度過高時(shí)，應(yīng)適當(dāng)稀釋后再行測定。盡量使每次滴定消耗樣液的體積和標(biāo)定斐林試劑所消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相近，約10ml。當(dāng)濃度過低時(shí)，可直接加入10ml試樣溶液，不再加10ml水，再用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)，記錄消耗的體積與標(biāo)定時(shí)消耗的還原糖體積之差相當(dāng)于10ml樣液中所含還原糖的質(zhì)量。)

4. 試樣溶液測定：

25ml的酸式滴定管中加入試樣溶液約20ml。向150ml錐形瓶中，依次加入Fehling's Reagent A液和B液各5ml，再向其中加入10ml水和2~4粒玻璃珠。加熱錐形瓶，控制時(shí)間在2min內(nèi)沸騰，保持沸騰以每2秒1滴的速度滴加試樣溶液，直到溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄消耗試樣溶液的總體積，平行操作3次，取平均值。

結(jié)果計(jì)算：

試樣中還原糖的含量（以某種還原糖計(jì)）按下邊公式計(jì)算：

X=m1×100/(m×F×V/250×1000)

當(dāng)濃度過低時(shí)，試樣中還原糖的含量（以某種還原糖計(jì)）按下邊公式計(jì)算：

X=m2×100/(m×F×10/250×1000)

備注：X=試樣中還原糖的含量（以某種還原糖計(jì)）（g/100g）；

m1=斐林試劑（A、B液各半）相當(dāng)于某種還原糖的質(zhì)量(mg)；

m2=標(biāo)定時(shí)體積與加入樣品后消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液體積之差相當(dāng)于某種還原糖的質(zhì)量(mg)；

m=試樣質(zhì)量(g)；

F=樣品系數(shù)，含淀粉食品為0.8，其他為1；

V=測定時(shí)平均消耗試樣溶液體積（ml）；

10=樣液體積（ml）；

250=定容體積（ml）；

1000=單位換算系數(shù)。

還原糖含量≥10g /100g時(shí)，計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字； 還原糖含量＜10g /100g時(shí)，計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

附：還原糖的定性試驗(yàn)

1. 配制斐林試劑工作液：臨用前，取適量試劑(A)、試劑(B)等量混合即成，即配即用。

2. 向潔凈試管中加入1~2ml待測樣品。

3. 向該試管中加入1ml斐林試劑工作液，充分搖勻。

4. 將上述混合液置于沸水浴中，并持續(xù)1～3min。

5. 觀察試管內(nèi)混合液顏色是否發(fā)生變化，其顏色變化順序應(yīng)為淺藍(lán)色-棕色-磚紅色(沉淀)。

鑒定結(jié)果：

還原性糖(如核糖、葡萄糖、果糖等)     磚紅色沉淀

非還原性糖(蔗糖、淀粉等)             無顏色變化

注意事項(xiàng)：

1. 試樣溶液中還原糖濃度過高時(shí)，應(yīng)適當(dāng)稀釋后再行測定。盡量使每次滴定消耗樣液的體積和標(biāo)定斐林試劑所消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相近。

2. 試樣溶液中還原糖濃度過低時(shí)，直接加入 10ml 試樣溶液，不再加10ml水，再用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)，記錄消耗的體積與標(biāo)定時(shí)消耗的還原糖體積之差相當(dāng)于10ml樣液中所含還原糖的質(zhì)量。

3. 也可按上述方法標(biāo)定4~20ml斐林試劑(A、B液各半)來適應(yīng)試樣中還原糖濃度的變化。

4. 斐林試劑的A、B液須分開儲(chǔ)存，臨用前按要求混合使用。

5. 斐林試劑B液呈強(qiáng)堿性，需小心操作。B液含有，可消除氧化亞銅沉淀對(duì)滴定終點(diǎn)的干擾。

6. 本品適用于各類食品中還原糖的測定，但在分析醬油等深色樣品時(shí)，會(huì)受色素干擾，滴定終點(diǎn)模糊不清，影響準(zhǔn)確性。

7. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：6個(gè)月有效。