增強(qiáng)型細(xì)胞活力/毒性檢測(cè)試劑盒

（增強(qiáng)型 CCK-8）說明書

  增強(qiáng)型 CCK-8 細(xì)胞活力測(cè)定試劑根據(jù)專有配方配制，同等用量下的靈敏度為傳統(tǒng) CCK-8 試劑 3~5 倍， 明顯高于國(guó)內(nèi)某產(chǎn)品?？捎糜跈z測(cè)細(xì)胞活力，可用于細(xì)胞增殖和毒性分析，方法簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確。

試劑的優(yōu)點(diǎn)：

1、 結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，試劑不影響細(xì)胞活力，顯色產(chǎn)物直接溶解于培養(yǎng)液，直接測(cè)定 OD 值即可準(zhǔn)確 反應(yīng)細(xì)胞活力。

2、 操作省時(shí)簡(jiǎn)單，試劑即開即用，無需配制；只需一步操作，即可測(cè)定。

3、 安全性好，不含放射性同位素和有害有機(jī)溶劑，使用安全。

4、 靈敏度高，靈敏度高于 MTT、XTT 及 CCK-8 等方法，同等用量下的靈敏度為傳統(tǒng) CCK-8 試劑 3~5 倍。

使用方法：

1、 使用 96 孔板，細(xì)胞培養(yǎng)和處理完畢。

2、 迅速加入增強(qiáng)型 CCK-8 試劑，每孔 100μl 培養(yǎng)基中加入 10μl 增強(qiáng)型 CCK-8 試劑。

3、 培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，37℃孵育 1~4 小時(shí)。

4、 于 490nm 處測(cè)定 OD 值。 5、 結(jié)果分析 將各測(cè)試孔的 OD 值減去對(duì)照孔或調(diào)零孔 OD 值。各平行孔的 OD 值取平均數(shù)。 細(xì)胞活力% =（加藥細(xì)胞 OD-空白 OD）/（對(duì)照細(xì)胞 OD-空白 OD）×* 6、 若使用 96 孔外的培養(yǎng)板，試劑用量等比例增減。

使用注意事項(xiàng)：

1、 *使用時(shí)，建議先做幾個(gè)孔摸索條件，考察接種細(xì)胞的數(shù)量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。

2、 加入試劑速度要快，以避免試劑殘留和加樣速度不一所致反應(yīng)時(shí)間不同造成的顯色誤差。有條件的情 況下，建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。為避免槍頭上的殘留所帶來的加樣誤差，增強(qiáng) 型 CCK-8 試劑可在加樣前用培養(yǎng)基稀釋混勻。

3、 試劑加入后輕輕振搖培養(yǎng)板，使增強(qiáng)型 CCK-8 試劑與培養(yǎng)基充分混勻。

4、 試劑加入后培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔細(xì)胞數(shù)量的多少而異。對(duì)于貼壁細(xì)胞，加入增強(qiáng)型 CCK-8 的培養(yǎng)時(shí)間一般為 1~4 小時(shí)，但在培養(yǎng) 30 分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度（根據(jù)細(xì)胞種類而定）。 與貼壁細(xì)胞相比，懸浮細(xì)胞較難顯色。對(duì)于懸浮細(xì)胞，在加入增強(qiáng)型 CCK-8 培養(yǎng) 1~4 小時(shí)后，可先從培養(yǎng) 箱中取出，目測(cè)染色程度或用酶標(biāo)儀測(cè)定決定。白細(xì)胞較難顯色，因此需要較長(zhǎng)的增強(qiáng)型 CCK-8 反應(yīng)時(shí)間 或增加細(xì)胞數(shù)量（10 5個(gè)細(xì)胞/孔）。若顯色困難，可以將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時(shí)后再確定。

5、 如果實(shí)驗(yàn)中有還原劑，需要檢查背景的 OD 值，即在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入藥物，然后加入增強(qiáng)型 CCK-8 試劑在一定時(shí)間內(nèi)檢測(cè)，和不加藥物的培養(yǎng)基進(jìn)行比較（只加增強(qiáng)型 CCK-8 試劑），如果 OD 值明顯 偏高，則說明有反應(yīng)。

6、 若細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化，建議更換新鮮培養(yǎng)基后再加入增強(qiáng)型 CCK-8 試 劑。含有酚紅的培養(yǎng)基不影響本試劑的使用。

7、 如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液，建議設(shè)定 600nm（或 600nm 以上）作為參比波長(zhǎng)，扣除參比波長(zhǎng)的 OD 值即可。

8、 如果要測(cè)定細(xì)胞的具體數(shù)量，需要先做一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。

9、 若測(cè)得 OD 值過高，可酌減鋪板細(xì)胞數(shù)或增強(qiáng)型 CCK-8 試劑用量。

試劑包裝：

100 次：1ml×1 瓶；

500 次：5ml×1 瓶；

3,000 次：5ml×6 瓶；

5,000 次：5ml×10 瓶；

10,000 次：100ml×1 瓶。

貯藏條件：

  增強(qiáng)型 CCK-8 在避光 0~5℃的條件下可存放一年，測(cè)定效果*不變。在-20℃的條件下可以貯存更久。 反復(fù)凍融會(huì)增加背景值，經(jīng)常使用時(shí)請(qǐng)于 0~5℃條件下保存。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不做其它用途。