組蛋白提取試劑盒

Total Histone Extraction Kit

產(chǎn)品簡介：

本組蛋白提取試劑盒是由一套完整的優(yōu)化 buffer 和試劑組成，用于從哺乳動物細(xì)胞或組織中提取總組蛋 白（H2A、H2B、H3 和 H4），整個(gè)流程可在 80min 內(nèi)完成，且可保持組蛋白提取物中的翻譯后修飾（PTM） 完整性，因此提取物可用于各種翻譯后修飾檢測及應(yīng)用，包括組蛋白甲基化、乙?；?、磷酸化、泛素化、 SUMO 化和 ADP-核糖基化作用研究。

包裝清單：

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.所提取組蛋白可保留所有相關(guān)翻譯后修飾，包括甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化、SUMO 化、 ADP-核糖基化以及 Neddylation 等。

2.建議每次從 10 8個(gè)細(xì)胞/0.1g 組織中提取組蛋白樣品。

3.整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程約需 80min。

4.無需超速離心。

操作步驟：

A：組織中提取

1.收集 0.1g 組織，加入 1.0ml Lysis Buffer 1 及適量蛋白酶抑制劑（依據(jù)實(shí)驗(yàn)選擇），冰上用組織研磨器或勻 漿管研磨。

2.將勻漿后樣品轉(zhuǎn)移至 1.5ml 離心管中，11000rpm 5min，吸棄上清保留沉淀。

3.至步驟 2。

B：細(xì)胞中提取

1.收集約 10 8個(gè)細(xì)胞，3000rpm 5min（懸浮細(xì)胞直接離心，貼壁細(xì)胞使用細(xì)胞刮刀或胰蛋白酶消化離心收集 均可。注意用預(yù)冷 PBS 清洗殘留培養(yǎng)基和胰蛋白酶等），吸棄上清。

2.至步驟 1。

步驟 1：加 1.0ml Lysis Buffer 1 及適量蛋白酶抑制劑（依據(jù)實(shí)驗(yàn)選擇），冰上孵育 30min（每 10min 用移液槍 吹打一次），4°C 11000rpm 離心 5min，棄上清。

步驟 2：于上述步驟離心管中加入 200μl Lysis Buffer 2，置于冰上 30min（每 10min 渦旋一次），4°C 11000rpm 離心 5min，吸取上清于一新離心管中。

步驟 3：加入 40μl Balance Buffer 于上述步驟離心管中，用移液槍輕輕吹勻。

步驟 4：使用 BCA 定量試劑盒定量。

步驟 5：于步驟 3 離心管中加入 2.4μl Adjust Buffer，輕輕吹勻，并應(yīng)用于下游研究。