SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒

產(chǎn)品編號： P10312

產(chǎn)品規(guī)格：100-150 次

產(chǎn)品內(nèi)容：   

  本產(chǎn)品所提供的 APS（過硫酸銨）為固體粉末，使用前加入超純水溶解即配制成 10%APS 溶液（1.5 g APS 加 15 ml 純水），將溶液分裝后置于-20℃保存，通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置 4℃ 保存一個月。

產(chǎn)品簡介：

  本產(chǎn)品包括 SDS-PAGE 凝膠制備所需全套試劑，只需自備純水，即可制備高質(zhì)量各種濃度的變性 PAGE 凝膠，方 便、快捷。

注意事項：

1. 10%APS 配制后分裝-20℃保存。APS 溶液不穩(wěn)定，應盡量減少室溫存放時間，每次取用后立即放回冰箱，以防 失效；若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時間延長，應考慮更換使用-20 度保存的 10%APS。

2. PAGE 凝膠的凝聚速度與溫度以及 APS、TEMED 的用量密切相關；在其它條件不變的情況下，可通過改變 APSTEMED 的用量，控制 PAGE 凝膠的聚合速度，凝膠聚合過快不利于操作；附表中的 APS 及 TEMED 量可 供參考，應根據(jù)實操作情況做適當?shù)恼{(diào)整。

3. 在凝膠配制過程中，尤其是液體混勻步驟，應盡量避免氣泡的產(chǎn)生。

4. 在分離膠上層加純水時要小心操作，加水時速度不能太快。

5. 丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性，操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。

6. 本產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體實驗或人體治療。

操作步驟：

  根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的 PAGE 分離膠配制濃度，適用膠濃度請參考附表 II 灌制分離膠（各試劑使用量請參考附表 3）

1. 參照凝膠模具說明書，裝配好凝膠模具。  注：加入上層篩板有助于加樣時保持填料與樣品均勻接觸，是否加 入上層篩板可根據(jù)實際情況選擇。

2. 將不同體積的 30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer、SDS Buffer 和純水在小燒杯或試管中混合。

3. 加入 10%APS 和 TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

4. 在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對于 mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端 1.5 cm 或距梳齒約 0.5 cm 即 可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層 1 cm 的水層，使凝膠表面保持平整。

5. 靜置 30-60 分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面后，表面凝膠已聚合。

II 灌制濃縮膠（各試劑使用量請參考附表 2）

1. 去除覆蓋在分離膠上的水層。

2. 將不同體積的 30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer、SDS Buffer 和純水在一個小燒杯或試管中混 合。

3. 加入 10%APS 和 TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

4. 將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端。

5. 將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

6. 靜置 10~20 分鐘，等待濃縮膠聚合。

7. 待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。

8. 進行常規(guī)電泳操作。

附表 1. SDS-PAGE 分離膠的濃度與適用待測蛋白檢測范圍

附表 2. 配制 5%SDS-PAGE 濃縮膠

附表 3. 配制 SDS-PAGE 分離膠