BCA 微量蛋白定量試劑盒說明書

產(chǎn)品貨號：34021

產(chǎn)品規(guī)格：1000 次

產(chǎn)品簡介：

  BCA 蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chǎn)品是基于 BCA（Bicinchoninic Acid）法研 制而成，實現(xiàn)了對蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì) 分子中的肽鏈 結(jié)構(gòu)能與 Cu 2+絡(luò)合生成絡(luò)合物，同時將 Cu 2+還原成 Cu +。BCA 試劑可敏感特異地與 Cu +結(jié)合，形成穩(wěn)定的有顏 色的復(fù)合物。在 562 nm 處有高的光吸收值，顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，可根據(jù)吸收值的大小來測定 蛋白質(zhì)的含量。本試劑盒專為低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設(shè)計，可準(zhǔn)確測定濃度為 0.2-100μg/ml 的蛋 白溶液，試劑盒的靈敏性高，平行性好，不同種蛋白之間的測量差異極低。每個試劑盒可以檢測 1000 個樣 品。

包裝清單：

產(chǎn)品名稱 包裝 儲存條件 試劑 A 50ml 4℃ 試劑 B 50ml 4℃ 試劑 C 5ml 4℃ 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA) 5mg/ml 1ml -20℃保存

操作步驟：

1.蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備 取適量 5mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)，用 PBS 稀釋至終濃度為 100μg/ml。例如取 10μl 5mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入 490μl PBS 即可配制成 100μg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)。蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是 為了簡便起見，也可以用 0.9% NaCl 或 PBS 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)需-20ºC *保存。

2. 工作液配制

根據(jù)樣品數(shù)量，按 1 體積試劑 C 加 25 體積試劑 B，混勻后加 26 體積試劑 A，再次混勻（按照 C-B-A 的 順序加，切勿更改加樣順序）。配制適量 BCA 工作液，充分混勻。

3. 蛋白濃度測定

a. 將標(biāo)準(zhǔn)品按 0、5、10、20、40、60、80、100μl 加到 96 孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀 釋液 補(bǔ)足到 100μl，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為 0、5、10、20、40、60、80、100μg/ml。標(biāo)準(zhǔn)品濃度可根據(jù)實 際實驗需求更改。

b. 加適當(dāng)體積樣品到 96 孔板的樣品孔中。如果樣品不足 100μl，需加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足 到 100μl。請注意記錄樣品體積。

c. 各孔加入 100μl 工作液，60ºC 放置 60 分鐘。

d. 用酶標(biāo)儀測定 A562，或 540-595nm 之間的其他波長的吸光度。

e. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和 A562 值做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用的樣品體積計算出樣品的蛋白 濃度。

常見問題：

1. 測定標(biāo)準(zhǔn)曲線時發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。 可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾 BCA 法測定蛋白濃度的物質(zhì)。

2. 是否每次測定時都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線？ 建議每次測定時都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因為 BCA 法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的 速度和溫度有關(guān)，所以除非準(zhǔn)確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則如需準(zhǔn)確測定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

注意事項：

  需酶標(biāo)儀一臺，測定波長為 540-595nm 之間，*562nm 。需 96 孔板。如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用 普通的分光光度計測定，但測定時，需根據(jù)比色皿的小檢測體積，適當(dāng)加大 BCA 工作液的用量使不小于 小檢測體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個 試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少。

  如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景，請試用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。

  EDTA 濃度必須小于 10mM，不兼容 EGTA。不適用 BCA 法時，請試用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。

  本產(chǎn)品*于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

  為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作