BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：34001

產(chǎn)品規(guī)格：100 次/250 次/500 次

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

  BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據(jù)目前世界上常用的兩種蛋白濃度檢測(cè)方法之一 BCA 法研制而成，實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測(cè)定的簡(jiǎn)單、高穩(wěn)定性、高靈敏度和高兼容性。靈敏度高，檢測(cè)濃度下限達(dá) 到 25μg/ml，小檢測(cè)蛋白量達(dá)到 0.5μg，待測(cè)樣品體積為 1-20μl。在 50-2000μg/ml 濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。

  BCA法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá) 5%的 SDS，5%的 Triton X-100，5%的 Tween20、60、80。但本試劑盒受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保 EDTA 低于 10mM， 無(wú) EGTA，二硫蘇糖醇(DTT)低于 1mM，β-巰基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不適用 BCA 法時(shí)建議試用 Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒。

包裝清單：

操作步驟：

1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備 取適量 5mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)，用 PBS 稀釋至終濃度為 0.5mg/ml。例如取 50μl 5mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入 450μl PBS 即可配制成 0.5mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)。蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡(jiǎn)便起見(jiàn)，也 可以用 0.9% NaCl 或 PBS 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后的 0.5mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)需-20ºC *保存。

2. BCA 工作液配制 根據(jù)樣品數(shù)量，按 50 體積 BCA 試劑 A 加 1 體積 BCA 試劑 B(50:1)配制適量 BCA 工作液，充分混勻。例如 5ml BCA 試劑 A 加 100μlBCA 試劑 B，混勻，配制成 5.1ml BCA 工作液。BCA 工作液室溫 24 小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

3. 蛋白濃度測(cè)定

a. 將標(biāo)準(zhǔn)品按 0、1、2、4、8、12、16、20μl 加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到 20μl，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為 0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

b. 加適當(dāng)體積樣品到 96 孔板的樣品孔中。如果樣品不足20μl，需加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到 20μl。請(qǐng)注意記錄樣品體積。

c. 各孔加入 200μlBCA工作液，37ºC放置20-30分鐘。

注: 也可以室溫放置 2 小時(shí)，或 60ºC 放置 30 分鐘。BCA法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。

d. 用酶標(biāo)儀測(cè)定 A562，或 540-595nm 之間的其他波長(zhǎng)的吸光度。

e. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用的樣品體積計(jì)算出樣品的蛋白濃度。

常見(jiàn)問(wèn)題：

1. 測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒(méi)有明顯變化。 可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾 BCA 法測(cè)定蛋白濃度的物質(zhì)。

2. 是否每次測(cè)定時(shí)都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線？ 建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)?BCA 法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度 和溫度有關(guān)，所以除非準(zhǔn)確控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則如需準(zhǔn)確測(cè)定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

注意事項(xiàng)：

1. 需酶標(biāo)儀一臺(tái)，測(cè)定波長(zhǎng)為 540-595nm 之間，*562nm 。需 96 孔板。如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用普通 的分光光度計(jì)測(cè)定，但測(cè)定時(shí)，需根據(jù)比色皿的小檢測(cè)體積，適當(dāng)加大 BCA 工作液的用量使不小于小 檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒 可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。

2. 如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景，請(qǐng)?jiān)囉?Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒。

3. EDTA 濃度必須小于 10mM，不兼容 EGTA。不適用 BCA 法時(shí)，請(qǐng)?jiān)囉?Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒。

4. 本產(chǎn)品*于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住 宅內(nèi)。

5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。