DNA 含量檢測(cè)試劑盒（細(xì)胞周期）

產(chǎn)品貨號(hào)：26350

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品簡介：

  細(xì)胞周期是指連續(xù)分裂細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂結(jié)束所經(jīng)歷的整個(gè)過程。在這個(gè)過程中， 細(xì)胞遺傳物質(zhì)復(fù)制并加倍，且在分裂結(jié)束時(shí)平均分配到兩個(gè)子細(xì)胞中去。細(xì)胞周期又可以分為間期和有絲分裂期， 細(xì)胞間期常劃分為休眠期（G0），DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成后期（G2），整個(gè)周期 可表示為G1→S→G2→M。DNA周期檢測(cè)可用來反應(yīng)細(xì)胞周期的各個(gè)期的狀況，即細(xì)胞增殖狀況。利用細(xì)胞內(nèi) DNA能夠和熒光染料（如碘化丙啶PI）結(jié)合的特性，細(xì)胞各個(gè)時(shí)期其DNA含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同，流 式細(xì)胞儀檢測(cè)的熒光強(qiáng)度也不一樣。

  細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮，核裂解，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞 凋亡的早期，細(xì)胞對(duì)前向角光散射的能力顯著降低，對(duì)90°角光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期， 前向角和90°角光散射的信號(hào)均降低。因此可以通過流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞光散射的變化來觀察凋亡細(xì)胞。用PI對(duì) 細(xì)胞進(jìn)行染色，凋亡細(xì)胞由于總DNA量降低，于正常G0/G1細(xì)胞群前出現(xiàn)DNA低染細(xì)胞群，即G1峰前出現(xiàn)亞二 倍體峰（sub-G1）,即細(xì)胞凋亡群。

本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞（懸浮、貼壁）的DNA含量（細(xì)胞周期）檢測(cè)。

產(chǎn)品內(nèi)容:

操作步驟（僅供參考）：

1. 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組，并收集細(xì)胞。

2. 用PBS洗滌細(xì)胞一次，1500rpm，5min離心收集，調(diào)整細(xì)胞濃度為 1×10 6 /ml,取1ml單細(xì)胞懸液。

3. 制備的單細(xì)胞懸液離心后，去除上清，在細(xì)胞中加入70%預(yù)冷乙醇500ul固定2小時(shí)至過夜，4℃保存，染色前 用PBS洗去固定液；如需要，細(xì)胞懸液可用200目細(xì)胞篩網(wǎng)過濾一次。

4. 細(xì)胞沉淀中加100µl RNase A溶液，重懸細(xì)胞，37℃水浴30min。

5. 再加入400µl PI染色液混勻，4℃避光孵育30min。

6. 上機(jī)檢測(cè)，記錄激發(fā)波長488nm處紅色熒光。

注意事項(xiàng)：

1. 碘化丙啶（PI）染色液保存和使用過程中應(yīng)注意避光。

2. PI有毒，操作時(shí)應(yīng)戴手套，并避免污染。

3. 熒光染料都存在淬滅問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。