4CN顯色試劑盒（HRP顯色）

產(chǎn)品貨號：T15230

產(chǎn)品規(guī)格：100ml/500ml

產(chǎn)品簡介：

4CN是4-氯-1-萘酚的縮寫，屬于辣根過氧化物酶(HRP)發(fā)色系統(tǒng)，與DAB、TMB顯色原理類似。

4CN顯色試劑盒(HRP發(fā)色)其顯色原理是4CN與氧化物形成紫色沉淀，可以用于細(xì)胞或組織在免疫組化或原位雜交時結(jié)合的辣根過氧化物酶顯色，也可用于Western等結(jié)合有辣根過氧化物酶的膜的顯色檢測。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 洗滌液

2. 蒸餾水

操作步驟（僅供參考）：

1. 常規(guī)組織切片、細(xì)胞樣品、膜與辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針孵育后，用適當(dāng)洗滌液洗滌。對于檢測內(nèi)源性辣根過氧化物酶的組織或細(xì)胞樣品，在適當(dāng)固定后，也可用洗滌液洗滌。

2. 按4CN顯色液：4CN氧化劑=比例混合,即為4CN顯色工作液，即配即用。

3. 洗滌過組織后，去除洗滌液，加入適量4CN顯色工作液，確保覆蓋樣品。

4. 室溫避光孵育30min或更長時間，直至顯色至預(yù)期深淺。

5. 去除4CN顯色工作液，用蒸餾水清洗即可終止顯色反應(yīng)。

6. 對組織切片或細(xì)胞樣品，反應(yīng)終止后，如有必要可用中性紅染色液染色，便于觀察。對于膜染色，反終止后可室溫晾干避光保存。

注意事項：

1. 4CN氧化劑易揮發(fā)，應(yīng)密閉保存。

2. 顯色后易褪色，請注意避光，以減少染料分解。

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

常見問題及可能原因：

1. 背景顯色太深

①在免疫組化時如果背景顯色太深，考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進行封閉，例如選購適當(dāng)?shù)姆忾]液或使用和一抗相同來源的血清(10%)進行封閉。也應(yīng)請注意選購經(jīng)過適當(dāng)吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。

②在進行含內(nèi)源性過氧化氫酶的免疫組化時，如果背景顯色太深，需注意滅活內(nèi)源性過氧化氫酶?？梢栽?/span>4體積甲醇中加入1體積3%過氧化氫，混勻后用于內(nèi)源性過氧化氫酶的滅活。

③可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗?jié)舛取?/span>

④選擇適當(dāng)強度的洗滌液，或延長洗滌時間。

2. 沒有顯色或顯色太弱

①當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在膜上，檢測二抗是否可以被正常顯色。

②考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用生物素檢測體系。

③適當(dāng)延長顯色時間，另外確定抗原修復(fù)是否對于使用的一抗是必需的。

有效期：6個月有效。