蛋白快速銀染試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：15138

產(chǎn)品規(guī)格：20T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：蛋白快速銀染試劑盒(Protein Fast Silver Stain Kit)是一種快速的可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白銀染染色的試劑盒，該試劑盒含有增敏步驟，可明顯降低背景。其優(yōu)點(diǎn)還在于：1、操作簡(jiǎn)單、快速；2、可用于2D凝膠的銀染，并可進(jìn)行后續(xù)的質(zhì)樸檢測(cè)；3、目的條帶清晰；4、不含甲醇。Protein Fast Silver Stain Kit與Protein SilverStain Kit相比，前者操作速度更快，但檢測(cè)靈敏度可能低于后者，尤其是在檢測(cè)小分子量蛋白質(zhì)的時(shí)候。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

試劑名稱                         20T                             保存條件

試劑(A): Silver Stain Sensitizer(500×)                 2×1ml                             室溫

試劑(B): Silver Stain(100×)                                   10ml                          室溫，避光

試劑(C): Silver Stain Developer(5×)                    2×100ml                      室溫，避光

試劑(D): Silver Stain Stop Buffer(10×)                  100ml                           室溫

自備材料：

1. 水平搖床或側(cè)擺搖床

2. 去離子水(超純)

3. 乙醇、冰乙酸

操作步驟 (僅供參考) ：

1. 準(zhǔn)備工作：以下操作以 8.5×5.5cm、厚度為 1.0mm 的凝膠為例，以凝膠全部浸沒(méi)到溶液為準(zhǔn)，一般用量是25ml，對(duì)于凝膠體積較大的，各溶液的使用量需按凝膠體積比例放大。整個(gè)銀染過(guò)程應(yīng)在搖床上進(jìn)行，搖床轉(zhuǎn)速控制在 60～70rpm。提前配制固定液，即按無(wú)水乙醇:冰乙酸:去離子水=5:1:4 的比例配制。提前配制洗滌液，即按無(wú)水乙醇:去離子水=1:4 的比例配制。

2. 水洗：電泳結(jié)束后，取凝膠放入去離子水中清洗 2 次，每次 5min。

3. 固定：取凝膠放入 50～100ml 固定液中，在搖床上室溫?fù)u動(dòng) 15～20min，重復(fù)固定步驟 1 次。

4. 洗脫：取凝膠放入洗滌液中清洗 2 次，每次 5min。

5. 水洗：去離子水清洗凝膠 2 次，每次 5min。

6. 增敏：配制銀染增敏工作液，即取 Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml 加入到 50ml 去離子水中，混勻，即 1×Silver Stain Sensitizer，一般應(yīng) 2h 內(nèi)用完。室溫下用 1×Silver Stain Sensitizer 孵育凝膠 2min，立即用去離子水清洗凝膠 2 次，每次 1min。

7. 銀染：配制銀染工作液，即取 Silver Stain(100×)0.5ml 加入到 50ml 去離子水中，混勻，即得 1×Silver Stain，一般應(yīng) 2h 內(nèi)用完。取凝膠入 1×Silver Stain，在搖床上室溫?fù)u動(dòng) 10～20min。

8. 水洗：棄液，在搖床上用去離子水清洗凝膠 2 次，每次 30s，搖動(dòng)速度在 60～70rpm?？偟乃磿r(shí)間應(yīng)控制在 1.5min 內(nèi)。

9. 顯影：配制銀染顯影工作液，即取 Silver Stain Developer(5×)10ml 加入到 40ml 去離子水中，混勻，即 1×Silver Stain Developer，一般應(yīng) 30min 內(nèi)用完。清洗凝膠后，立即置于 1×Silver Stain Developer 中，室溫孵育 2～10min，直至蛋白條帶清晰可見(jiàn)。一般顯色 30s 后就會(huì)出現(xiàn)棕色沉淀，繼續(xù)顯影 2～3min，亦可延長(zhǎng)至5min 以上，如果顯影效果不佳，可重新更換 1×Silver Stain Developer 繼續(xù)顯影。

10. 迅速用去離子水清洗凝膠以避免顯影過(guò)度，背景染色。立即加入銀染終止液，搖床上搖動(dòng) 10min，以終止顯色反應(yīng)。(配制銀染終止液，即取 Silver Stain Stop Buffer(10×)10ml 加入到 90ml 去離子水中，混勻，即 1×Silver Stain Stop Buffer，一般應(yīng) 24h 內(nèi)用完。)

11. 保存：棄終止液，加入去離子水 50ml，搖床上搖動(dòng) 2～5min，棄液。短期保存于新鮮去離子水，長(zhǎng)期保存可以制備干膠。

注意事項(xiàng)：

1. 背景過(guò)深：①顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；②洗滌不充分；③凝膠中殘留物質(zhì)未去除干凈；④去離子水的純度過(guò)低。

2. 蛋白條帶較淺：①蛋白的半胱氨酸含量過(guò)低；②銀染后水洗時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；③蛋白量較低；④固定后的洗滌時(shí)間不夠，導(dǎo)致乙酸殘留。

3. 凝膠上出現(xiàn)雜質(zhì)或非蛋白的印跡：①凝膠沒(méi)有被充分浸沒(méi)，應(yīng)加入足量溶液；②容器沒(méi)有清洗干凈；③凝膠接觸金屬物質(zhì)；④指紋或其他壓跡。

4. 本染色液呈酸性，有輕微腐蝕性，使用時(shí)請(qǐng)作必要防護(hù)。5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。有效期：

6 個(gè)月有效。