細(xì)胞核提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：10258

產(chǎn)品包裝：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

細(xì)胞核提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核。適合于動(dòng)物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。

產(chǎn)品組成：

操作步驟：
1. 樣本處理

a. 組織勻漿：稱取100~200mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer，再加入50µL Reagent A，0℃冰浴中上下研磨組織20次；有未研磨開的組織，可用雙層紗布過濾。

b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌，800g離心5~10min收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)。每次提取需要5 ×10⁷個(gè)細(xì)胞，加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞，再加入50µL Reagent A，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨細(xì)胞20~30次。

2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中，4℃，700g離心5min。細(xì)胞核沉淀在收集管底部，棄上清。加入 0.5 mL 冰預(yù)冷的 Lysis Buffer 重懸沉淀。

3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中，置于Medium Buffer之上，4℃，700 g 離心5min。細(xì)胞核沉淀在管底。

4. 棄上清，在細(xì)胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細(xì)胞核沉淀，1000g離心10min ，棄上清，得到較純的細(xì)胞核沉淀。

5. 用50-100µL Store Buffer或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事項(xiàng)：

1. 為保證獲得完整的細(xì)胞核，務(wù)必做到：第一，全程低溫操作；第二，快速；第三，在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞，這是制備細(xì)胞核的最關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。

2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度，不同的離心機(jī)可據(jù)此精確計(jì)算離心速度。

3. 進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解細(xì)胞核。

轉(zhuǎn)速與離心力換算:

G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]²

G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示；[rpm]²即：轉(zhuǎn)速的平方； R為半徑，單位為厘米。

保存條件：

短期使用可4℃儲存，長期保存請置于-20℃或-70℃。