RNA病毒基因組提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：26239

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒適合于從血清、細(xì)胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因組，不適合于細(xì)胞等組織內(nèi)RNA病毒基因組的提取。使用本試劑盒提取的基因組RNA可用于RT-PCR實(shí)驗(yàn)。產(chǎn)品組成：試劑名稱 50T 100T蛋白酶 K 1ml 2ml洗柱液 50ml 50ml×2結(jié)合液 25ml 50ml漂洗液 15ml 15ml×2RNase free ddH2O 15ml 15ml×2RNase free 吸附柱 50 個(gè) 100 個(gè)RNase free 收集管(2ml) 50 個(gè) 100 個(gè)

操作步驟：使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入一瓶新開啟的無(wú)水乙醇，加入到離瓶口約 0.5-1cm 距離，蓋好搖勻。所有離心步驟均在 2-8℃條件下進(jìn)行。

1. 取病毒上清液 0.5ml，12000rpm 離心 5min，盡量吸盡上清使用，棄去沉淀（如無(wú)沉淀可省去此步）。

2. 向病毒上清中加入 20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K，充分混勻，65℃消化 10min，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。

3. 吸附柱前處理：從包裝中取出吸附柱，放入收集管中，加入 700ul 洗柱液，室溫放置 2 分鐘，2-8℃12000rpm離心 2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中待用。

4. 向病毒上清中加入 500ul 結(jié)合液，充分混勻。再向管中加入 400ul 無(wú)水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響 RNA 的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，靜置 2min。（吸附柱的最大容積為750ul，可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。）

5. 12000rpm 離心 2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

6. 向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7. 向吸附柱中加入 500ul 漂洗液，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8. 12000rpm 離心 2min，將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。

9. 將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50ul-100ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的RNase free ddH2O，室溫放置 5min，12000rpm 離心 2min。即可得到高質(zhì)量的病毒基因組 RNA。

注意事項(xiàng)：

1. 經(jīng)常更換新手套。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌，可能導(dǎo)致 RNase 污染。使用無(wú) RNase 的塑料制品和 槍頭避免交叉污染。

2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的 RNA 提取量也下降。

3. 若結(jié)合液中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解。

4. 如果樣品消化不*，后面的離心步驟中可能會(huì)出現(xiàn)堵柱子的情況，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。

5. 洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率。

6. RNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-70℃，以防 RNA 降解。

7. RNA 檢測(cè)：得到的基因組 RNA 片段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關(guān)。由于病毒不含有核糖體RNA，所以常規(guī)電泳無(wú)法檢測(cè)，只有后期實(shí)驗(yàn)才可檢測(cè)到。D260 值為 1 相當(dāng)于大約 40 μg/ml 單鏈 RNA。

保存條件：室溫（15℃-25℃）干燥條件下可保存 12 個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于 2℃-8℃。