革蘭氏陽性菌基因組DNA提取試劑盒產(chǎn)品貨號(hào)：26228產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，提取革蘭氏陽性菌基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料，能夠高效專一吸附DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、 PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。產(chǎn)品組成：試劑名稱 50T 100T溶菌酶 0.3g 0.5gRNase A 1ml 1ml×2蛋白酶 K 1ml 1ml×2溶液 A 10ml 20ml溶液 B 10ml 20ml漂洗液 15ml 15ml×2洗脫液 15ml 30ml吸附柱 50 個(gè) 100 個(gè)收集管 50 個(gè) 100 個(gè)操作步驟：使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。1. 取細(xì)菌培養(yǎng)液 1ml，12000rpm 離心 1min.，盡量吸除上清。2. 向菌體中加入 200ul 終濃度為 20mg/ml 的溶菌酶，用溶菌酶干粉加入緩沖液 20 mM Tris, pH 8.0；2 mMNa2-EDTA；1.2% Triton X-100，37℃處理 30min 以上。（如果需要去除 RNA，可加入 20ul RNase A（10mg/ml）溶液）3. （可選作）向上述溶液中加入 200ul 溶液 A，振蕩或用移液器吹打使菌體充分懸浮，室溫放置 30min-60min。4. 向管中加入 20ul 的蛋白酶 K (10mg/ml)，充分混勻，55℃消化 30-60min，消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直至樣品消化*為止，此時(shí)可見菌液呈清亮粘稠狀。5. 向管中加入 200ul 溶液 B，充分顛倒混勻，如出現(xiàn)白色沉淀，可于 75℃放置 15-30min，沉淀即會(huì)消失，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果溶液未變清亮，說明樣品消化不*，可能會(huì)導(dǎo)致 DNA 的提取量以及純度降低，還可能堵塞吸附柱。6. 向管中加入 200ul 無水乙醇，充分混勻，此時(shí)還可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入到吸附柱中，靜置 2min。7. 12000rpm 離心 2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。8. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否己加入無水乙醇)。12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。9. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，12000rpm 離心 l min， 棄廢液，將吸附柱放入收集管中。10. 12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。11. 將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm 離心 1min。12. 離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置 2min ，12000rpm 離心 2min，即可得到高質(zhì)量的細(xì)菌基因組 DNA。注意事項(xiàng):1. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。2. 若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。3. 如果實(shí)驗(yàn)中的離心步驟出現(xiàn)柱子堵塞的情況，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul，體積過小會(huì)影響回收效率；洗脫液的 pH 值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍)， pH 值低于 7. 0 會(huì)降低洗脫效率。DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。5. DNA 濃度及純度檢測(cè)：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)?；厥盏玫降?DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。DNA 應(yīng)在 OD260處有顯著吸收峰，OD260 值為 1.0 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/0D280 比值應(yīng)為 1.7-1.9，如果 洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)?pH 值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不 表示純度低。保存條件：室溫(15-25℃) 干燥保存，復(fù)檢期 12 個(gè)月，2-8℃保存時(shí)間更長(zhǎng)。