動(dòng)物組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：26221

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，提取革蘭氏陽(yáng)性菌基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料，能夠高效專一吸附DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品組成：試劑名稱 50T 100TRNase A 1ml 1ml×2蛋白酶 K 1ml 1ml×2溶液 A 10ml 20ml溶液 B 10ml 20ml漂洗液 15m1 15ml×2洗脫液 10m1 20m1吸附柱 50 個(gè) 100 個(gè)收集管 50 個(gè) 100 個(gè)

操作步驟：使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。

1. 樣品的處理：

   a、細(xì)胞：取 1×106 -1×107 個(gè)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，12000rpm 離心 1min 收集細(xì)胞，貼壁細(xì)胞先用胰蛋白酶消化處理，再用預(yù)冷的 PBS 吹打成細(xì)胞懸液，然后 12000rpm 離心 1min 收集細(xì)胞，盡量除去上清，加 200ul 溶液 A，振蕩至*混勻。

   b、組織：組織量不宜過(guò)大，一般不要超過(guò) 25mg，可以使用勻漿器勻漿，最好用液氮研磨成粉末狀，再用預(yù)冷的PBS 或無(wú)菌水充分懸浮，然后 12000rpm 離心 1min 收集細(xì)胞，盡量除去上清，加 200ul 溶液 A，振蕩至*混勻。

   2. 向懸浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml)，55℃放置 15min。

   3. 加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml )，充分顛倒混勻，55℃水浴消化，細(xì)胞消化時(shí)間較短，組織消化時(shí)間較長(zhǎng)，一般需要 1-3 個(gè)小時(shí)才能完成（鼠尾需要消化過(guò)夜）。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直至樣品消化*為止。 消化*的指標(biāo)是：液體清亮及粘稠。

   4. 加入 200ul 體積溶液 B，充分顛倒混勻，如出現(xiàn)白色沉淀，可放置于 75℃15-30min，沉淀即會(huì)消失，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說(shuō)明樣品消化不*，可能導(dǎo)致提取的 DNA 量少及不純，還有可能導(dǎo)致堵塞吸附柱。5. 加入 200ul 無(wú)水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中。

   6. 12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

   7. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)， 12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

   8. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

   9. 12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。

   10. 將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm 離心 2min。

   11. 可將離心所得洗脫液再加入吸附柱中，12000rpm 離心 2min，即可得到高質(zhì)量的基因組 DNA。

   注意事項(xiàng):

   1. 試劑盒拆封后，RNase A 和蛋白酶 K 需放置-20℃保存

   2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。

   3. 如果試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響效果。

   4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率：洗脫液的 pH 值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍)，pH 值低于 7.0 會(huì)降低洗脫效率。

   保存條件：室溫(15℃-25℃) 干燥保存，復(fù)檢期 12 個(gè)月，2-8℃保存時(shí)間更長(zhǎng)。