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NaOH/SDS溶液 核酸類
  • NaOH/SDS溶液 核酸類
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貨物所在地:上海上海市

更新時間:2024-10-07 21:00:07

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NaOH/SDS溶液 核酸類由NaOH溶液和SDS溶液等組成,臨用前等量混合使用,溶液呈堿性,是堿裂解法提DNA的重要成分。

NaOH/SDS溶液 核酸類


產(chǎn)品貨號T11027

產(chǎn)品規(guī)格:2×100ml/2×500ml

產(chǎn)品簡介:

堿裂解法是常用的小量制備質(zhì)粒DNA的方法,可用于抽提微克級別的質(zhì)粒DNA。葡萄糖-Tris-EDTA溶液(GTE)、NaOH/SDS溶液和乙酸鉀溶液(5mol/L,pH4.8)是其常用試劑。NaOH/SDS溶液由NaOH溶液和SDS溶液等組成,臨用前等量混合使用,溶液呈堿性,是堿裂解法提DNA的重要成分。其原理是:當(dāng)菌體在NaOH和SDS溶液中裂解時,蛋白質(zhì)與DNA發(fā)生變性,加入中和液(乙酸鉀溶液)后,質(zhì)粒DNA分子迅速復(fù)性,呈溶解狀態(tài),離心時留在上清中,由于蛋白質(zhì)和染色體DNA不復(fù)性而呈絮狀,離心時可沉淀下來。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成:

    產(chǎn)品名稱     2×100ml2×500ml保存條件
試劑(A): NaOH溶液100ml500ml室溫
試劑(B):SDS溶液100ml500ml室溫


操作步驟(僅供參考)

1. 配置 NaOH/SDS 溶液:取 NaOH 溶液和 SDS 溶液等比例混合后使用,宜臨用前配置。

2. 接種一個單菌落于 LB 培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)至飽和狀態(tài)。

3. 取 1.5ml 培養(yǎng)液,10000~12000g 離心 20~60s,棄上清。

4. 用 100μl 葡萄糖-Tris-EDTA 溶液*重懸沉淀,室溫靜置 5min。

5. 加入 200μl 新鮮配置的 NaOH/SDS 溶液,顛倒混勻數(shù)次,可在冰上放置 2~5min,使細(xì)胞膜破裂。

6. 加入 150μl 乙酸鉀溶液,將管溫和顛倒數(shù)次混勻,見白色絮狀沉淀,可在冰上放置 3~5min,此時,質(zhì)量 DNA復(fù)性,染色體和蛋白質(zhì)不可逆變性,形成不可溶復(fù)合物。

7. 加入 150μl 酚氯仿異戊醇,震蕩混勻,4℃12000r/min 離心 10min。繼續(xù)后續(xù)實驗。

注意事項:

1. NaOH 溶液呈強(qiáng)堿性,請小心操作,如果皮膚接觸,應(yīng)盡快擦干并用流水充分沖洗。

2. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期12個月。


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