維生素B2檢測(cè)試劑盒（熒光光度法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1717

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

維生素B2 (Vitamin B2 )又稱(chēng)核黃素，是一種異咯嗪衍生物，耐熱、微溶于水，中性水溶液及乙醇溶液呈黃色，具有很強(qiáng)的熒光，在pH6~7的溶液中熒光*，在pH=11時(shí)熒光消失。核黃素可被還原性物質(zhì)還原為無(wú)色的二氫化物，同時(shí)失去熒光，二氫化物在空氣中易重新氧化，恢復(fù)其熒光。

尚寶維生素B2檢測(cè)試劑盒(熒光光度法)是利用Vitamin B2水溶液在激發(fā)波長(zhǎng)440~500nm(多為460nm)，發(fā)射波長(zhǎng)范圍約為510~550nm(多為520nm)，當(dāng)加入有還原性的亞硫酸鹽時(shí)，核黃素被還原為無(wú)熒光的物質(zhì)，根據(jù)稀核黃素溶液熒光強(qiáng)度的變化即可定量檢測(cè)Vitamin B2的含量。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1.        待測(cè)樣品如青菜、水果、牛奶等

2.        蒸餾水

3.        勻漿器

4.        稀鹽酸或稀氫氧化鈉

5.        離心管或試管

6.        熒光光度計(jì)

操作步驟 (僅供參考) ：

1.        稀釋組織勻漿液：取適量的組織勻漿液(10×)，按組織勻漿液(10×)：蒸餾水=1：9的比例稀釋?zhuān)@得1×組織勻漿液，待用。

2.        樣品準(zhǔn)備：

A）固體樣品：取待測(cè)材料如青菜、水果、松針等，清洗擦干，準(zhǔn)確稱(chēng)量5g置于研磨器內(nèi)研磨，加入少量1×組織勻漿液，研磨碎，留取上清，再次用1×組織勻漿液研磨，最后一并倒入50ml離心管，補(bǔ)充1×組織勻漿液至50ml，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)pH值至4.5(如無(wú)條件可用pH試紙粗略測(cè)定)，充分混勻后4000g離心5min或者過(guò)濾，上清或?yàn)V液定容至50ml，濾液4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

B）液體樣品：牛奶、飲料等液體樣品，取10ml牛奶于100ml燒杯中，加入0.1mol/L的稀鹽酸50ml，放入滅菌鍋中處理30min，冷卻后用稀氫氧化鈉調(diào)pH至6，再用稀鹽酸調(diào)pH至4.5，沉淀雜質(zhì)，過(guò)濾后將濾液轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中定容，濾液4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

3.        稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取適量的Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml)，按Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml)：1×組織勻漿液=1：9稀釋成Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)(10μg/ml)，4℃保存。注意：Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml)需要充分溶解混勻，否則會(huì)導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)值不準(zhǔn)確。

4.        制備亞硫酸鹽工作液：取一支亞硫酸鹽100mg粉末，充分溶解于2ml蒸餾水，即配制成50mg/ml的亞硫酸鹽工作液，即配即用。

5.        Vitamin B2檢測(cè)：選用恰當(dāng)?shù)臑V色片，測(cè)定的激發(fā)波長(zhǎng)為460nm，發(fā)射波長(zhǎng)為520nm。提前預(yù)熱儀器30min，蒸餾水調(diào)零，以下表6號(hào)管的Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)(2.5μg/ml)作為參比溶液調(diào)熒光光度計(jì)的熒光強(qiáng)度讀數(shù)滿刻度(100%)，分別測(cè)定其他標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)樣品的相對(duì)熒光強(qiáng)度，如果熒光強(qiáng)度大于100%，需要稀釋后再行測(cè)定。分別測(cè)定加入亞硫酸鹽工作液前后的熒光值，記為F₀和F_T 。加入亞硫酸鹽后，應(yīng)充分混勻，及時(shí)檢測(cè)。

Vitamin B 2 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及待測(cè)樣品操作表

計(jì)算：

溶液的熒光強(qiáng)度校準(zhǔn)值：F= F₀ -F_T

式中：F=校正后的熒光強(qiáng)度

F₀=還原前熒光強(qiáng)度

F_T=還原后熒光強(qiáng)度

以各管Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)的濃度(μg/ml)或含量(μg)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的校正后的熒光強(qiáng)度(F)為縱坐標(biāo)，做出Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)曲線。

根據(jù) Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品管的校正后的熒光強(qiáng)度 (F)即可計(jì)算出待測(cè)樣品中Vitamin B2的實(shí)際濃度和含量。

100ml液體樣品中VitaminB2含量(μg/100ml)= C×V₂ ×100/V₁

100g固體樣品中Vitamin B2含量(μg/100g)=C×V₃ ×100/m

式中：C=待測(cè)樣品中Vitamin B2的濃度(μg/ml)

V₁ =檢測(cè)體系中加入的濾液體積(ml)=5

V₂ =液體樣本濾液的總體積(ml)=100

V₃ =固體樣品的上清液總體積(ml)=50

m=固體樣品的質(zhì)量(g)=5

注意事項(xiàng)：

1.        在上述操作中，要嚴(yán)格避免VitaminB2受到陽(yáng)光直射，否則易分解。

2.        待測(cè)樣品如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置于2~8℃避光保存，3天內(nèi)穩(wěn)定。

3.        含核黃素的標(biāo)準(zhǔn)品或樣品一旦加入亞硫酸鹽后會(huì)因產(chǎn)生二氫化物失去熒光，但二氫化物在空氣中又易重新氧化，恢復(fù)熒光，因此應(yīng)在10min內(nèi)檢測(cè)完畢，而且越快越好。

4.        如果樣品濃度過(guò)高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

有效期：6個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸，4℃保存。