超氧陰離子自由基檢測試劑盒(磺胺比色法)

產(chǎn)品貨號：BA1541

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品簡介：

超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂 質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞， 與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。 生物體內(nèi)的分子氧可以經(jīng)過單電子還原轉(zhuǎn)變?yōu)槌蹶庪x子自由基(O2-)，超氧陰離子自由基 既可以直接作用于蛋白質(zhì)和核酸等大分子，也可以衍生為羥自由基、單線態(tài)氧、過氧化氫及 脂質(zhì)過氧物自由基等對細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能具有破壞作用的活性氧。

超氧陰離子自由基檢測試劑盒(磺胺比色法)又稱超氧陰離子清除能力檢測試劑盒，其檢測原理是利用羥胺氧化的方法可以檢測生物體系中超氧陰離子自由基(O2-)，即 超氧陰離子自由基(O2-)與羥胺反應(yīng)生成NO2-，NO2-在氨基苯磺酸和萘胺作用下反應(yīng)生成粉 紅色的偶氮物質(zhì)對-苯磺酸-萘胺，以分光光度計(jì)測定530nm處吸光度，在一定范圍內(nèi)顏色 深淺與超氧陰離子自由基(O2-)成正比，根據(jù)NO2-反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線將A₅₃₀換算成NO2-濃度， 再依據(jù)上述關(guān)系式即可計(jì)算出O2-濃度，該試劑盒主要用于測定植物組織中的超氧陰離子自 由基含量或超氧陰離子清除能力。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、蒸餾水。

2、實(shí)驗(yàn)材料：植物組織(大豆、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等。

3、研缽或勻漿器。

4、離心管或試管。

5、低溫離心機(jī)。

6、恒溫箱或水浴鍋。

7、比色杯。

8、分光光度計(jì)。

操作步驟：（僅供參考）

1、準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取正常或逆境下的新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取1~1.5g，加入2ml預(yù)冷的O2- Lysis buffer后冰浴條件下勻漿或研磨，4℃ 10000g 離心10min，上清液即為超氧陰離子自由基提取液，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，4℃保存，用于超氧陰離子自由基的檢測。

③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的超氧陰離子自由基，可以使用O2 - Lysis buffer進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、配制系列NO2-標(biāo)準(zhǔn)溶液：取出NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM)恢復(fù)至室溫后，NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM)按下表繼續(xù)稀釋：

3、O2-加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的超氧陰離子自由基濃度過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置平行管。

4、O2-測定：以空白調(diào)零，比色杯光徑1cm，分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管、測定管530nm處吸光度(即為A標(biāo)準(zhǔn)、A測定)。

計(jì)算：

以系列NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1~6號)含量(μM)為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測定管的吸光度進(jìn)而計(jì)算NO2-含量。根據(jù)如下公式計(jì)算具體樣品中超氧陰離子自由基(O2-)的含量：

植物組織樣品 O2-(μM/g)=2×n×VT/(W×VS)

式中：2=NO2-與 O2-間的化學(xué)計(jì)量數(shù)；

n=從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的NO2-含量(μM) VT=超氧陰離子自由基提取液總體積(ml) W=樣品鮮重(g) VS=測定時(shí)加入提取液體積(ml)

血清、尿液等樣品O2-(μM/ml)=2×n×N/VS

式中：2=NO2-與O2-間的化學(xué)計(jì)量數(shù)

n=從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的 NO2-含量(μM) N=稀釋倍數(shù)VS=測定時(shí)加入提取液體積(ml)

注意事項(xiàng) ：

1、 實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于4℃。

2、 如果樣品中含有較多的葉綠素，會干擾測定結(jié)果，可在加入羥胺溶液25℃水浴孵育20min后用等體積yi醚萃取葉綠素，再行顯色反應(yīng)。

3、 如果沒有分光光度計(jì)，也可以使用普通的酶標(biāo)儀測定，但應(yīng)考慮酶標(biāo)儀的最大檢測體 積。

4、 所測樣本的濃度過高，應(yīng)用O2- Lysis buffer 稀釋樣品后重新測定。

有效期：6個(gè)月有效，4℃運(yùn)輸，4℃保存。