超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)試劑盒（微量法）

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1068

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

SOD（EC 1.15.1.1）是一種廣泛存在于生物體內(nèi)的金屬酶，是重要的氧自由基清除劑，能催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成H₂O₂和O₂。SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是H₂O₂主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

通過(guò)huang嘌呤及huang嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2^-)，O2^-可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜，后者在 560nm處有吸收；SOD可清除O2^-，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液藍(lán)色越深，說(shuō)明SOD活性愈低，反之活性越高。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體5mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體100μL×1支，4℃保存；使用前先離心再吹打混勻。

試劑三：液體4mL×1瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×1支，4℃保存。（由于試劑量極少，容易產(chǎn)生誤差，現(xiàn)規(guī)格為0.0003g/支，使用時(shí)稱(chēng)取0.00003g即可。）

試劑五：液體2mL×1瓶，4℃保存；臨用前將試劑四加入試劑五中，并震蕩溶解。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品的前處理：

(1) 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)胞、細(xì)菌樣本：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎（功率20%或200w，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

組織樣本：稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿； 8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

(2) 血清(漿)樣品：直接檢測(cè)。

二、測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至560nm，蒸餾水調(diào)零。

2、測(cè)定前將試劑一、三和五37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴5min以上。

3、樣本測(cè)定（按順序加入下列試劑）

充分混勻，37℃水浴30min后，560nm處測(cè)定各管吸光值A。計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照，ΔA空白=A空1-A空2。如底部有沉淀，混勻后再行測(cè)定。

注意：

1、樣本和試劑二使用時(shí)在冰上放置。

2、樣本較多時(shí)，可按表格配置工作液（包含試劑一、二、三），試劑五必須最后加入。

3、空白管1和空白管2各只需做1~2管；每個(gè)樣本有一個(gè)對(duì)照管。

4、反應(yīng)完成后，可能有沉淀生成，混勻后測(cè)定即可。

三、SOD活性計(jì)算：

1、抑制百分率的計(jì)算

抑制百分率＝(ΔA空白-ΔA測(cè)定) ÷ΔA空白× 100%

盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)，越靠近50%越準(zhǔn)確。如果計(jì)算出來(lái)的抑制百分率小于30%或大于70%，則通常需要調(diào)整加樣量后重新測(cè)定。如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度比較高的待測(cè)樣品。

2、SOD酶活性單位：在上述huang嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50%時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位。

3、SOD酶活性計(jì)算：

（1）血清（漿）SOD活性(U/mL)=[抑制百分率÷( 1-抑制百分率)×V反總]÷V樣×F

=11.11×抑制百分率÷( 1-抑制百分率)×F

（2）組織、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞SOD活力計(jì)算：

A：按樣本蛋白濃度計(jì)算

SOD活性 (U/mg prot)=[抑制百分率÷（1-抑制百分率）×V反總]÷（V樣×Cpr）×F

=11.11×抑制百分率÷( 1-抑制百分率) ÷Cpr×F

B：按樣本鮮重計(jì)算

SOD活性 (U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)×F

=11.11×抑制百分率÷( 1-抑制百分率) ÷W×F

C：按細(xì)菌或細(xì)胞個(gè)數(shù)計(jì)算

SOD =活力 (U/10⁴ cell)= [抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)×F

=0.022×抑制百分率÷( 1-抑制百分率)×F

V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本的體積，0.018mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)，F：樣本稀釋倍數(shù)。