谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）活性檢測(cè)試劑盒（微量法）

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1112

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

GPT（EC 2.6.1.2）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化氨基酸和酮酸轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)，在氨基酸代謝中具有重要作用。此外，哺乳動(dòng)物肝細(xì)胞GPT活性很高，當(dāng)肝細(xì)胞壞死，GPT釋放到血液中，血清GPT活性顯著增高。因此，GPT被世界衛(wèi)生組織推薦為肝功能損害最敏感的檢測(cè)指標(biāo)。

GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-er硝基苯肼溶液，不僅終止上述反應(yīng)，而且與酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在堿性條件下呈紅棕色，可以在505nm讀取吸光值

并計(jì)算酶活力。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體4mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體3.5 mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體30 mL×1瓶，4℃保存；

標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，20µmol/mL丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品，4℃保存。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸水。

操作步驟：

一、樣品測(cè)定的準(zhǔn)備

1、 細(xì)胞或細(xì)菌的制備 ：

先收集細(xì)胞或細(xì)菌樣品到離心管內(nèi)，棄上清，按照每500萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)胞或細(xì)菌（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）。3500g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)冰浴行勻漿。3500g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至505nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定

首先將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至2µmol/mL，按下表混合標(biāo)準(zhǔn)品和試劑一得到濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)管：

3．在EP管或在96孔板中加入下列試劑

注:0µmol/mL標(biāo)準(zhǔn)管為空白管。

三、計(jì)算公式：

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以各標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸，以?A（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）為y軸做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程y=kx+b。將（A測(cè)定管-A對(duì)照管）帶入方程求x值。

2、GPT活性計(jì)算：

（1）按樣本鮮重計(jì)算：

單位定義：每小時(shí)每g樣品催化產(chǎn)生1µmol丙酮酸的量為一個(gè)GPT活力單位。

GPT（U/g鮮重）=x×（V樣本+V試劑一）÷（W×V樣本÷V樣總）÷T=12x÷W。

（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位定義：每小時(shí)每mg組織蛋白催化產(chǎn)生1µmol丙酮酸的量為一個(gè)GPT活力單位。

GPT（U/mg prot）=x×（V樣本+V試劑一）÷（Cpr×V樣本）÷T=12x÷Cpr。

（3）按血清（漿）體積計(jì)算：

單位定義：每小時(shí)每mL血清（漿）樣品催化產(chǎn)生1µmol丙酮酸的量為一個(gè)GPT活力單位。

GPT（U/mL）=x×（V樣本+V試劑一）÷V樣本÷T=12x。

（4）按細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計(jì)算：

單位定義：每小時(shí)每10⁴個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌催化產(chǎn)生1µmol丙酮酸的量為一個(gè)GPT活力單位。

GPT（U/10⁴ cell）=x×（V樣本+V試劑一）÷（500×V樣本÷V樣總）÷T=0.024x。

V樣本：樣本體積，0.005mL；V試劑一：試劑一體積，0.025mL；V樣總：提取液體積，1mL；W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，萬(wàn)。