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什么是液相色譜以及它是如何工作的
閱讀：2465 發(fā)布時(shí)間：2022-1-13
液相色譜按其分離機(jī)理，可分為四種類型：吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜、凝膠色譜法。
液相色譜是一種色譜技術(shù)，用于分離和分析溶液中混合物的化學(xué)成分，以確定是否存在或不存在特定成分，如果存在，則存在多少。高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是使用高色譜分辨率進(jìn)行高效分離的高性能分析。分離的組分也可以在檢測(cè)后使用餾分收集器分離，作為純化的手段。HPLC有多種不同的配置，可用于分離分子量從半揮發(fā)性小分子到幾萬(wàn)千道爾頓的大蛋白生物分子的溶解組分。液相色譜法是一種非常流行的分析技術(shù)，廣泛用于環(huán)境監(jiān)控，農(nóng)業(yè)，醫(yī)藥領(lǐng)域。
流動(dòng)相通常是溶劑，借助高壓泵將樣品輸送并且通過(guò)系統(tǒng)。它在分離過(guò)程中也起著至關(guān)重要的作用?；旌衔镏袑?duì)流動(dòng)相具有較高親和力的組分將快速遷移通過(guò)色譜柱，而與固定相之間幾乎沒(méi)有相互作用。當(dāng)組分的帶離開(kāi)色譜柱或從色譜柱洗脫時(shí)，檢測(cè)器將給出與組分濃度成正比的響應(yīng)。進(jìn)樣與檢測(cè)之間的時(shí)間稱為保留時(shí)間。對(duì)于一組給定的色譜條件，組分的保留時(shí)間將非常明確，可以與鑒定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較。
在反相色譜法中，極性較小的分析物會(huì)優(yōu)先分配到非極性固定相中，并且保留時(shí)間更長(zhǎng)。數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)將檢測(cè)器響應(yīng)記錄為色譜圖中保留時(shí)間的函數(shù)。通常對(duì)色譜圖中記錄的峰進(jìn)行積分以確定峰面積，該峰面積與樣品中存在的組分的濃度成正比。
自動(dòng)進(jìn)樣器將樣品注入流動(dòng)相后，在色譜柱中進(jìn)行分離過(guò)程。色譜系統(tǒng)的選擇性對(duì)色譜分辨率的影響最大，應(yīng)針對(duì)所研究的應(yīng)用和組件進(jìn)行定制。選擇性可以通過(guò)改變流動(dòng)相（不同溶劑）或固定相中存在的特定化學(xué)官能團(tuán)（改變色譜柱類型）的電化學(xué)強(qiáng)度來(lái)改變。